[发明专利]一种评估HCP检测用多克隆抗体覆盖率的方法

说明书

本发明提供一种评估HCP检测用多克隆抗体的覆盖率的方法，所述方法先将HCP多克隆抗体偶联于固体基材，再利用这种固体基材捕获HCP样品中的蛋白，随后分离所捕获的HCP蛋白并检测HCP样品中的蛋白总数和所捕获蛋白的数量就能够获得HCP多克隆抗体的覆盖率。本发明的方法操作简便、条件可控、结果可靠，并且在各次操作之间能够具备很高的一致性。

技术领域

本发明涉及检测领域；具体地说，本发明涉及评估HCP检测用多克隆抗体覆盖率的方法。

背景技术

通过宿主细胞(如细菌、酵母或哺乳动物、昆虫或植物细胞系)的重组蛋白表达技术已在许多生物制药产品中得到广泛的应用。在这类产品的生产过程中，宿主细胞来源的蛋白质(Host cell proteins，HCP)会不可避免地引入生产工艺流程中，从而存在于最终的药品中。研究发现生物制药产品中残留HCP的主要危害是其有可能诱导机体产生抗HCP抗体，这些抗体可能会引起患者产生临床症状。此外，HCP可能作为免疫佐剂，诱导产生抗药抗体，影响药物安全性或有效性，因此全球各个国家的监管机构对HCP残留都有严格的限量要求。

目前本领域常规采用HCP ELISA检测试剂盒。由于存在操作方便快捷、成本较低、检测的高通量等诸多优点，该试剂盒已被监管机构和企业广泛运用于中间品及成品的放行检中。HCP ELISA检测试剂盒的开发中最重要的一环是对多克隆抗体的表征，其中就包括多克隆抗体的覆盖率验证实验，即需要证明ELISA试剂盒中所使用的多克隆抗体与大量的HCP可以广泛反应。在申报临床实验时每个企业都需要提供相关的数据来证明这一点，进而继续进行接下来的研发工作。

为验证HCP ELISA检测试剂盒中多克隆抗体的覆盖率，本领域已经开发了各种技术，例如抗体亲和提取方法(Antibody Affinity Extraction)或2D-WB法。然而，这些方法均各自存在明显的不足之处。例如，工艺复杂、时间成本和经济成本非常高，在实际运用中存在误判；检测过程受操作影响大；印迹和凝胶之间的点很难匹配并且无法标准化等等缺点。

因此，本领域急需操作简便、条件可控、结果可靠的评估HCP检测用多克隆抗体覆盖率的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种评估HCP检测用多克隆抗体覆盖率的方法，这种方法应具备以下优点：

1.与HCP ELISA检测尽可能保持一致性，从而提高结果的真实性；

2.保证结果的一致性和可重复性；

3.保证小分子量蛋白的不丢失；

4.减少非特异性吸附，确保高亲和的HCP可以洗脱；

5.实验操作的标准化。

本发明还有一目的是提供实施上述本发明方法的设备。

在第一方面，本发明提供一种评估HCP检测用多克隆抗体的覆盖率的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将所述HCP检测用多克隆抗体固定于固体基材，从而得到固定有所述HCP检测用多克隆抗体的固体基材；

(2)将步骤(1)所得的固定有所述HCP检测用多克隆抗体的固体基材与HCP样品接触，从而使得所述多克隆抗体与HCP样品中的蛋白发生特异性结合；

(3)使得所述多克隆抗体与所结合的蛋白解离；

(4)检测与所述多克隆抗体特异性结合的蛋白的数量A以及HCP样品中蛋白的数量B；和

(5)计算数量A与数量B之比得到HCP检测用多克隆抗体的覆盖率。

在具体的实施方式中，在所述步骤(4)后进行步骤(4-1)：检测所述多克隆抗体特异性结合的蛋白以及HCP样品中蛋白之间具有相同的分子量和等电点的蛋白的数量C；和