[发明专利]一种组织完整、利于显微观察的植物组织切片的制备方法

说明书

一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法，包括对新鲜鸭茅根部组织块的杀死与固定、采用的固定液为FAA混合固定液、即为福尔马林：冰醋酸：体积浓度70%乙醇=1:1:18、以体积比计，冲洗，脱水与透明，浸蜡与包埋，修块与切片，展片与烤片，脱蜡、复水与番红染色，固绿染色、脱水与透明，以及封片步骤；在冲洗步骤后、脱水与透明步骤前，还进行琼脂糖预包埋，所述琼脂糖预包埋是将冲洗后的鸭茅根部组织块包埋在经熬化后的5%琼脂糖凝胶中。本发明方法制得的鸭茅根部组织石蜡切片，其组织完整、细胞界限清晰、色彩鲜艳、颜色对比鲜明、切片干净。

本发明是专利申请号201610490667.3、发明名称为“一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及石蜡切片技术领域，具体涉及植物根部组织石蜡切片的方法。

背景技术

随着科学技术的发展与植物生态解剖学的兴起，石蜡切片成为了不同生境植物或演替系列优势种生态适应性研究的重要手段。但是，传统的石蜡切片方法存在制片周期长，易受条件限制，制片中使用化学试剂较多，对人有一定的毒害，易使材料变脆、变硬或变形，某些内含物易于消失，常使组织变小，甚至使组织扭转变形，细胞所含物质缩小而折光性增强，影响观察正确性，且制片成本较高等问题，加上若所取的组织块较小，则如何快速准确的包埋成功也是制片的关键之处。

发明内容

本发明目的在于提供一种组织完整、细胞边界清晰的鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法。

本发明目的通过如下技术方案实现：

一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法，包括对新鲜鸭茅根部组织块的杀死与固定，冲洗，脱水与透明，浸蜡与包埋，修块与切片，展片与烤片，脱蜡、复水与番红染色，固绿染色、脱水与透明，以及封片步骤；其特征在于：在冲洗步骤后、脱水与透明步骤前，还进行琼脂糖预包埋，所述琼脂糖预包埋是将冲洗后的鸭茅根部组织块包埋在经熬化后的5%琼脂糖凝胶中、以质量百分含量计；

所述杀死与固定步骤中，采用的固定液为FAA混合固定液，即为福尔马林：冰醋酸：体积浓度70 %乙醇=1:1:18、以体积比计；所述在杀死与固定后、冲洗前，还进行酸化，具体是将固定好的鸭茅根部组织块置于0.5 mol/L三氯乙酸溶液中，酸化6-7 d，在酸化过程中，3-4 d时，更换一次0.5 mol/L三氯乙酸溶液；

所述脱水与透明步骤是将经所述琼脂糖预包埋后的鸭茅根部组织块依次置于体积比为1:5:4的正丁醇、体积浓度为95%乙醇、蒸馏水混合液中2 h，置于体积比为2:5:3的正丁醇、体积浓度为95%乙醇、蒸馏水混合液中2 h，置于体积比为3:5:2的正丁醇、体积浓度为95%乙醇、蒸馏水混合液中2 h，置于体积比为5:4:1的正丁醇、体积浓度为100%乙醇、蒸馏水混合液中2 h，置于体积比15:4:1的正丁醇、体积浓度为100%乙醇、蒸馏水混合液中2 h，置于分析纯正丁醇中2 h，再置于分析纯正丁醇中2 h。

进一步，上述浸蜡与包埋步骤中，将脱水与透明处理后的鸭茅根部组织块放于42℃的体积比为1:1的二甲苯和软蜡混合剂中，分Ⅰ、Ⅱ两级，各1小时；然后转移至53℃纯软蜡中浸蜡6小时，分Ⅰ、Ⅱ两级，各3小时；再转移至63℃纯硬蜡中浸蜡3小时，分Ⅰ、Ⅱ两级，各1.5小时；所述软蜡为熔点46-48℃的石蜡，所述硬蜡为熔点为56-58℃的石蜡。上述Ⅰ、Ⅱ两级是指重复两次，每次换上新的没使用过的相应蜡液。

进一步，上述展片与烤片步骤中，在用于展片的载玻片上涂上蛋白甘油粘贴剂，所述蛋白甘油粘贴剂由体积比为1:1的鸡蛋清和甘油组成。

进一步，上述脱蜡、复水与番红染色步骤中，采用二甲苯脱蜡三次，每次25分钟；所述复水依次进入无水乙醇Ⅰ级、无水乙醇Ⅱ级、无水乙醇Ⅲ级、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中、乙醇均为体积百分浓度，每步停留4-5分钟，然后蒸馏水洗5秒后进入1%水溶液番红染液、质量浓度，密封过夜。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级是指重复三次，每次换上新的没使用过的无水乙醇。