[发明专利]一种角膜羟脯氨酸检测方法

权利要求书

1.一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、建立标准曲线：取不同浓度的羟脯氨酸标准溶液测定吸光度，以羟脯氨酸标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线；

步骤二、消解角膜：将角膜置于酶解液中，于水浴条件下酶解，向含角膜的酶解液中加入酸解液对角膜进行酸解，得到消解后角膜；

步骤三、测定吸光度：将消解后角膜冷却稀释后进行吸光度测定，记录结果；

步骤四、确定羟脯氨酸含量：将步骤三所得结果与步骤一所述标准曲线对比，得到角膜中羟脯氨酸的含量。

2.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中所述酶解液中角膜含量为15g/L～25g/L。

3.根据权利要求2所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，所述酶解液中角膜含量为20g/L。

4.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中所述酶解液包括蛋白酶K、氯化钙、三羟甲基氨基甲烷和水，所述酶解液中蛋白酶K的含量为1g/L，所述蛋白酶K、氯化钙和三羟甲基氨基甲烷的质量比为1:1.11:6.057。

5.根据权利要求4所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，所述酶解液的配制为取氯化钙和三羟甲基氨基甲烷加水溶解，加入pH调节剂调节溶液pH至7.4~8.0，向调节pH后的溶液中加入蛋白酶K，所述pH调节剂为HCl溶液。

6.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中酶解的温度为55℃~65℃，酶解的时间为6h～10h。

7.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中所述酸解液为浓度为3.0mol/L~4.5mol/L的硫酸溶液。

8.根据权利要求7所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，所述酸解液为浓度为3.8mol/L的硫酸溶液。

9.根据权利要求1所述的一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中酸解的温度为90℃～120℃，酸解的时间为10h～16h。