[发明专利]C4植物叶肉细胞、维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法在审
| 申请号： | 201910179907.1 | 申请日： | 2019-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN109722409A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 林雪乔;刘明媚;李秀秀;秦晓春 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 类囊体膜 维管束鞘细胞 叶肉细胞 分离提取 生物技术领域 工艺提取 机械作用 处理量 酶解法 破壁机 档位 蛋白 | ||
1.一种C4植物叶肉细胞和维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取C4植物的叶片，清洗后擦掉水分，去掉叶片中间的叶脉，将叶片剪成0.5-1cm小条；
（2）取剪碎的叶片放入在冰箱提前预冷的破壁机中，加入预冷后的捣碎液，破碎至叶片外层的叶肉细胞80-90％掉落；
（3）低温过滤，捣碎液涮洗破壁机，再过滤，合并滤液，即为叶肉细胞；
（4）将步骤（3）的滤渣加入预冷后的捣碎液，继续破碎至叶肉细胞90-99%及以上掉落；过滤，留滤渣，弃滤液；
（5）将步骤（4）的滤渣加入预冷后的捣碎液，破碎至维管束鞘细胞80-95%及以上掉落，过滤，滤液即为维管束鞘细胞；
（6）将步骤（3）的叶肉细胞，离心，加入预冷后的涨破液，搅拌，离心，加贮存液，放入液氮迅速冷冻放-80℃冰箱保存，得到叶肉细胞的类囊体膜；
（7）将步骤（5）得到的维管束鞘细胞，离心，加入预冷后的涨破液，搅拌，离心，加贮存液，放入液氮迅速冷冻放-80℃冰箱保存，得到维管束鞘细胞的类囊体膜。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）-（5）中的捣碎液为蔗糖、NaCl、Tricine的混合液，所述的蔗糖的终浓度为0.3M；NaCl的终浓度为15mM；Tricine的终浓度为30 mM，NaOH调pH为8.0。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中的捣碎液的用量为5-10ml/g叶片。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（6）、（7）中的涨破液为Tricine溶液，浓度为15mM，且用NaOH调整pH至8.0。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（6）、（7）中的涨破液的用量为2-5ml/g叶片。
6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（6）、（7）中的存贮液为蔗糖、Tricine的混合液，所述的蔗糖的终浓度为0.3M；Tricine的终浓度为20 mM；NaOH调pH为8.0。
7.采用权利要求1的方法制备得到的叶肉细胞的类囊体膜。
8.采用权利要求1的方法制备得到的维管束鞘细胞的类囊体膜。
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