[发明专利]凝血酶溶液及其使用方法

说明书

本发明涉及凝血酶溶液及其使用方法。本发明提供了用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，以及通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。

本申请为分案申请，原申请的申请日为2013年11月28日，申请号为201380063192.4(PCT/IL2013/000088)，发明名称为“凝血酶溶液及其使用方法”。

技术领域

本发明涉及药物溶液领域，并且更具体地涉及用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法的凝血酶溶液，以及通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。

背景技术

凝血酶是在凝血过程中由血浆中的凝血酶原形成的蛋白水解酶。

凝血酶作为凝血因子广泛用于临床应用以通过将纤维蛋白原转化成纤维蛋白而使伤口止血。它是外科敷料的常见组分，并且已与纤维蛋白原及其它凝血蛋白质组合用于二组分止血系统诸如纤维蛋白胶、粘合剂和密封剂。

已知的是，在贮存之前将凝血酶溶液冻干以产生固体凝血酶组合物，以便减少蛋白质降解，其中该固体凝血酶组合物可在使用前复原。冻干通常是指冷冻混合物以及然后降低水浓度(例如通过升华到不支持生物或化学反应的水平)的方法。由冻干方法所得的多孔海绵状固体材料称为粉饼。希望此类固体凝血酶组合物具有低水含量(例如，小于约3％)，长期(优选地在室温下)保持结构和功能稳定性，以及在复原时与在冻干之前溶液中凝血酶的活性相比保持高百分比的凝血酶活性。

背景技术凝血酶溶液的实例在EP 813598B1、US 5,605,884、US 4,877,608、US2010/0074865、US 5,733,873、EP 1766003和US 2010/0168018中有所描述。背景技术凝血酶溶液在所存在的赋形剂的数量和类型方面以及在各种赋形剂的浓度方面变化相当大。

冷冻保护剂或稳定剂通常用于凝血酶溶液以避免凝血酶因冷冻应力而变性或失活，以使蛋白质在后续生产步骤中稳定，以及延长储存寿命。冷冻保护剂的示例包括糖，诸如蔗糖、乳糖和海藻糖；糖醇，诸如甘露糖醇；以及表面活性剂，诸如聚乙二醇、TritonX-100、TWEEN-20和TWEEN-80。除了充当稳定剂以外，甘露糖醇和蔗糖(在较低程度上)还被用作膨松剂，其有助于提供具有强物理结构的粉饼。使用膨松剂对于具有低固体物质含量(单位体积)的配方是尤其重要的。

人血清白蛋白(HSA)还广泛用于生物制药配方，作为稳定剂和膨松剂(H.R.Constantino,M.J.Pikal：《生物制药的冻干》，斯普林格出版社，2004年(Lyophilization of Biopharmaceuticals,Springer,2004))。

EP 813598B1公开了用于冻干的简单凝血酶配方，其包含：40mM的葡糖酸、20mM的柠檬酸三钠和150mM的NaCl；US 5,605,884和US 4,877,608公开了包含高达10％的糖诸如蔗糖、甘露糖醇或麦芽糖的配方；US 2010/0074865公开了包含5.7％的乳糖、3.1％的海藻糖和0.001％的TWEEN-80的配方；以及US 5,733,873公开了包含0.001-0.025％的聚山梨醇酯80(TWEEN-80)且具有或不具有0.1％的PEG 4000和2％的甘露糖醇的配方。

氯化钠(NaCl)常用于减少蛋白质在生物制药配方的冻干过程中的沉淀和聚集。然而，EP 1766003公开了NaCl可能存在问题，因为其降低玻璃化转变温度，从而必须采用低初级干燥温度和延长的干燥循环时间。另外，US 2010/0168018公开了不具有NaCl或具有以微量存在的NaCl的配方。

此类冻干已知的凝血酶溶液的方法的持续时间通常非常长，这增加了方法的成本和/或产生如下固体凝血酶组合物：其具有相对高的水含量和/或在复原时与冻干前溶液中的凝血酶活性相比保持相对低百分比的凝血酶活性。

发明内容