[发明专利]一种微生物菌肥联合该菌发酵液抑制烟草黑胫病的方法

说明书

本发明公开了一种微生物菌肥联合该菌发酵液抑制烟草黑胫病的方法，包括以下步骤：(1)制备发酵菌液、(2)制备菌肥、(3)施用底肥、(4)浇灌发酵菌液；本发明利用蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)制备发酵菌液和菌肥，并且采用将菌液和菌肥联合用药的方法，使蜡样芽孢杆菌以固态和液态的形式施用，促进蜡样芽孢杆菌在土壤中定植并最终形成优势菌群，二者有机结合从而对烟草黑胫病起到较好的防效。本发明减少了化学肥料和化学农药的使用，保护和促进了烟草的生长，促进环境友好。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及利用蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)生产的菌肥联合该菌发酵液抑制烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var.nicotiane)的发生。

背景技术

烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var.nicotiane)是烟草的毁灭性病害，同时也是世界烟草生产中危害最严重的病害之一，该病在我国各产烟省均有不同程度的发生，且危害较为普遍和严重。近年来由于连作烟田面积扩大以及连作年限的增长，不少地方烟草黑胫病有加重流行的趋势。多年来人们为了减轻该病造成的损失，曾试用农业防治、化学防治、抗病育种等多种方法控制烟草黑胫病，但由于该病菌的游动孢子形成速度快且数量大，侵染烟株后潜育期短、发病快，在一个生长季节可以发生多次再侵染，同时该病有时还与其它病害混合发生，从而导致一些抗黑胫病品种抗性的丧失；而且，抗病品种的大面积连年连片单一种植，布局不合理，易使优良品种的抗性丧失，缩短抗病品种的使用年限，而且一旦病害流行则难以控制。目前，生产上用来防治烟草黑胫病的化学药剂多为苯基酰胺类及乙磷铝等同一种或作用机制相同的几种内吸性杀菌剂，很容易产生耐药性，从而引起药效下降，药剂用量增加。烟草是叶用经济作物，对烟叶的外观和内在质量有特殊的要求，农药残留、病原菌耐药性以及对卷烟卫生的影响大大限制了农药的大规模利用。在烟草及烟草制品逐渐向无公害方向发展的趋势下，生物防治作为一种安全、有效的方法而越来越受到重视。

烟草黑胫病菌的拮抗细菌有假单胞杆菌(Pseudomonas spp.)和芽孢杆菌(Ba-cillus spp.)，它主要通过产生抗菌素而使烟草黑胫病菌菌丝溶解；通过在田间土壤中加入拮抗细菌发现能显著降低烟草黑胫病菌的侵染机会，从而减少发病率。目前采用的主要方法就是将拮抗菌制成浓缩液体制剂、纯孢子粉剂或者复合固体粉剂，然后在烟苗移栽前施用。这些方法较为单一，由于生防菌株受到复杂土壤生态因子的影响,生防菌剂防效的稳定性得不到保证，防效不明显。而本发明所采用的是“联合用药”的方法，先通过底肥施用，后在通过多次喷施使生防菌能够在土壤中定植并最终形成优势菌群，从而对烟草黑胫病起到较好的防效。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有采用单一拮抗菌剂(液)防治烟草黑胫病技术的不足。提供一种将该病害拮抗菌肥与拮抗菌剂联合防控病害的新技术。通过联合作用能够提高拮抗菌在土壤中的定植能力，有效提高其对的该病害的抗性。对改善烟田微环境，促进生物防治技术的发展具有重要意义。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

1、制备发酵菌液

将固体保存的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)采用改良产芽孢液体培养基进行发酵培养，得到发酵菌液。所述发酵菌液中有效活菌数≥1.0亿/g(cfu)。所述改良产芽孢液体培养基成分如下：葡萄糖1.5％、麦芽提取物2.5％、蛋白胨0.2％、NaCl 0.1％、(NH₄)₂SO₄0.1％、无水CaCl₂0.03％、ZnSO₄·7H₂O 0.02％，FeCl₃·6H₂O 0.002％，H₂O 1000m1。