[发明专利]一种体外人睾丸精子发生模型的制备方法在审
申请号: | 201910184175.5 | 申请日: | 2019-03-12 |
公开(公告)号: | CN110029087A | 公开(公告)日: | 2019-07-19 |
发明(设计)人: | 沙家豪;周琪;郭雪江;袁艳;李来花 | 申请(专利权)人: | 南京医科大学 |
主分类号: | C12N5/076 | 分类号: | C12N5/076 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人: | 唐循文 |
地址: | 211166 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 睾丸 睾丸精子 培养基 琼脂块 种体 制备 二氧化碳环境 精子发生 男性不育 器官发生 人类睾丸 体外研究 组织分离 人睾丸 小块 置换 研究 治疗 开发 | ||
1.一种体外人睾丸精子发生模型的制备方法,其特征在于包括以下步骤:将人睾丸组织离体后分离为小块,置于提前至少8小时进行完全睾丸培养基置换过的0.25%-1.5%的琼脂块上,加入完全睾丸培养基到达琼脂块高度的三分之一到三分之二,于32-37℃,5%二氧化碳环境中进行培养10-100天。
2.根据权利要求1 所述的方法,其特征在于所述人睾丸组织包括各种年龄阶段人睾丸。
3.根据权利要求1 所述的方法,其特征在于所述琼脂块浓度为0.25%。
4.根据权利要求1 所述的方法,其特征在于所述培养温度为34℃。
5.根据权利要求1 所述的方法,其特征在于所述完全睾丸培养基的成分包含:90%(v/v) αMEM,10%(v/v)血清替代物(KOSR),10-50 ng/mL胶质细胞源性神经营养因子(GDNF) 、10-50 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)、10-50 ng/mL表皮生长因子(EGF)、50-100ng/mL转化生长因子β家族激活素A(Activin A)、10-50 ng/mL干细胞生长因子(SCF)、10-50ng/mL骨形态发生蛋白(BMP 4/7)、10-50 mM睾酮(testosterone)、100-200 ng/mL促卵泡激素(FSH)和50-100 mg/mL垂体提取物(BPE)。
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