[发明专利]基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一组基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测引物和探针，其特征在于，包括：

鸭甲肝病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和质量探针SEQ ID No.23；鸭甲肝病毒3型的PCR引物序列SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和质量探针SEQ ID No.24；鸭星状病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和质量探针SEQ ID No.25；鸭星状病毒2型的PCR引物序列SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和质量探针SEQ ID No.26；鸭呼肠孤病毒1型的PCR引物序列SEQ ID No.9、SEQ ID No.10和质量探针SEQ ID No.27；鸭呼肠孤病毒2型的PCR引物序列SEQ ID No.11、SEQ ID No.12和质量探针SEQ ID No.28；坦布苏病毒的PCR引物序列SEQ ID No.13、SEQ ID No.14和质量探针SEQ ID No.29；禽流感病毒的PCR引物序列SEQ ID No.15、SEQ ID No.16和质量探针SEQ ID No.30；小鹅瘟病毒的PCR引物序列SEQID No.17、SEQ ID No.18和质量探针SEQ ID No.31；鸭肠炎病毒的PCR引物序列SEQ IDNo.19、SEQ ID No.20和质量探针SEQ ID No.32；内参基因β-actin的PCR引物序列SEQ IDNo.21、SEQ ID No.22和质量探针SEQ ID No.33。

2.一种基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测试剂盒，其特征在于，所述鸭源病毒检测试剂盒包括如权利要求1所述的鸭源病毒检测引物和探针。

3.根据权利要求2所述的鸭源病毒检测试剂盒，其特征在于，PCR引物序列SEQ IDNo.1-SEQ ID No.22的5’端修饰有如SEQ ID No.56所示的碱基序列。

4.根据权利要求2所述的鸭源病毒检测试剂盒，其特征在于，所述鸭源病毒检测试剂盒还包括进行反转录和PCR反应所需的试剂。

5.一种非诊断目的定点基因质谱法检测鸭源病毒多重PCR产物的方法，其特征在于，所述方法利用如权利要求2所述的试剂盒同时检测鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、鸭星状病毒1型、鸭星状病毒2型、鸭呼肠孤病毒1型、鸭呼肠孤病毒2型、坦布苏病毒、禽流感病毒、小鹅瘟病毒和鸭肠炎病毒10种病毒和1种内参基因β-actin。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：

利用多重PCR技术同时扩增待检样品中的十种鸭源病毒的目的基因和内参基因β-actin；

将质量探针混合并对质量探针混合物进行特异的单个碱基延伸；

利用质谱检测质量探针的单个碱基延伸产物，并对质谱检测结果进行分析。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，质谱检测采用的是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI-TOF MS。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，对质谱检测结果进行分析时使用的是基因分型系统。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，质量探针混合物中各个质量探针的浓度分别为：β-actin质量探针6.80μM、禽流感病毒质量探针6.00μM、坦布苏病毒质量探针7.20μM、鸭甲肝病毒1型质量探针13.60μM、小鹅瘟病毒质量探针6.00μM、鸭呼肠孤病毒1型质量探针10.00μM、鸭星状病毒2型质量探针6.80μM、鸭星状病毒1型质量探针7.20μM、鸭呼肠孤病毒2型质量探针15.60μM、鸭肠炎病毒质量探针12.00μM、鸭甲肝病毒3型质量探针21.60μM。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，进行多重PCR扩增时，10种病毒和1种内参基因的22条PCR引物在反应体系中等摩尔混合。