[发明专利]基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开一种基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测试剂盒及检测方法，涉及分子生物学检测技术领域。所述鸭源病毒检测试剂盒包括用于检测10种鸭源病毒的PCR引物及质量探针；本发明还提供一种可同时检测10种鸭源病毒的检测方法，该方法至少包括多重PCR、质量探针延伸、质谱分析检测步骤，该方法灵敏度高、成本低、特异性好，可以实现不同鸭源病毒的多重检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域。更具体地，涉及一种基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测试剂盒及检测方法。

背景技术

鸭病毒病是危害养鸭业的主要疫病。鸭肝炎病毒、鸭星状病毒、鸭肠炎病毒和鸭呼肠孤病毒是引起鸭病的经典毒株。20世纪90年代以来，禽流感病毒称为危害养鸭业的重要病原。近年来，我国鸭群中出现了许多新的病毒病，给养鸭业造成了巨大的经济损失。例如，番鸭“白点病”、由新型鸭肝炎病毒和星状病毒引起的鸭病毒性肝炎、番鸭“新肝病”和北京鸭“脾坏死病”等。自2010年以来，坦布苏病毒感染遍布我国蛋鸭主产区，导致产蛋下降及死亡。2015年，樱桃谷北京鸭感染鹅细小病毒发生了短喙和侏儒综合征。目前比较流行的鸭病毒性传染病的主要病原包括鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型、鸭星状病毒1型、鸭星状病毒2型、鸭呼肠孤病毒1型、鸭呼肠孤病毒2型、坦布苏病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒和鸭肠炎病毒。这10种病毒包括RNA病毒和DNA病毒，对这10种病毒进行同时检测对于鸭病毒病的防控具有重要意义。

针对致病病毒的常见诊断方法包括病毒培养、分子诊断方法和血清学检测等。其中，病毒培养方法包括在胚胎和细胞上分离病毒；分子诊断方法包括聚合酶链式反应(PCR)、多重PCR(mPCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)等；血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)。在临床上，病毒分离耗时较长，且有些病毒例如鸭星状病毒的分离培养较困难；血清学检测一般是针对血清中特定病原的抗体进行检测，一般用于检测抗体水平；近年来，分子生物学技术得到了快速发展，PCR技术具有以其灵敏、快速和特异等特征得到了广泛应用。一般来讲，普通PCR技术一般只用于检测一种病毒，灵敏性一般可以检测到10²～10³拷贝；荧光定量PCR技术的灵敏度较高，可达到10¹～10²拷贝，但由于荧光通道的限制，一般也只用于3种病原以下的同时检测。最近，还有研究者开发了一种基于毛细管电泳的鸭病毒检测的GeXP方法，虽然该方法所检测的病毒包括11种，但是并不包括近期比较流行的鹅细小病毒和鸭星状病毒等病毒，且该方法在11种病毒均存在的情况下灵敏度仅为10³拷贝，并且在结果判断方面存在较大的人为误差。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种可同时检测十种鸭源病毒的检测试剂盒，利用该试剂盒进行鸭源病毒检测的。

本发明的另一个目的在于提供一种利用上述试剂盒进行鸭源病毒检测的方法。

为达到上述第一个目的，本发明采用下述技术方案：

一组基于定点基因质谱检测的鸭源病毒检测引物和探针，包括：