[发明专利]氧化型硫代辅酶I在均相酶免疫诊断试剂中的应用

说明书

本发明涉及体外诊断检测技术领域，尤其涉及氧化型硫代辅酶I在均相酶免疫诊断试剂中的应用，所述的诊断试剂为甘胆酸检测试剂以及CMPF试剂。本发明克服了现有技术中的甘胆酸试剂以及CMPF试剂稳定性较差，导致检测结果准确度和重复性较差的缺陷，通过将均相酶免疫法均相酶免疫诊断试剂中的氧化型辅酶II用氧化型硫代辅酶I进行替代，有效解决均相酶免疫诊断试剂稳定性较差的问题，改善试剂检测结果的重复性，提高检测结果的准确度；同时提高了试剂的抗血红蛋白干扰能力，减弱临床样本溶血现象对检测结果的影响，提升均相酶免疫诊断试剂的可检测性，使得测试试剂适用于常规酶标仪，有效降低检测成本，同时节约试剂和原料的用量。

技术领域

本发明涉及体外诊断检测技术领域，尤其涉及氧化型硫代辅酶I在均相酶免疫诊断试剂中的应用。

背景技术

NADP是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotidephosphate)的缩写，曾称为三磷酸吡啶核苷酸(TPN)或辅脱氢酶Ⅱ或氧化型辅酶Ⅱ。它是是烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸与一个磷酸分子以酯键结合的物质，广泛存在生物界。其化学性质、吸收光谱以及氧化还原形式等均类似于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖型氧化还原酶具有重要生理功能，但难以选择性研究；同时，相应氧化还原反应需消耗化学计量的辅酶，成为大规模应用的瓶颈，侯淑华等(侯淑华.NADP+类似物的合成及作为辅酶的性质研究[J].中国科学院大连化学物理研究所,2011.)研究了NAD类似物的物理化学和生物学性质表明，NAD类似物保持了NAD的氧化还原特性。

均相酶免疫均相酶免疫诊断试剂(比如甘胆酸试剂)，整个反应发生在一个液相均相体系中，样本中游离的甘胆酸与葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物竞争性结合抗甘胆酸特异性抗体位点。在抗体量固定时，样本中游离的甘胆酸越多，则竞争结合的抗体越多，而与抗体结合的酶标偶联物就越少。游离出来的甘胆酸酶标偶联物催化氧化型辅酶II(NADP)转化为还原型辅酶II(NADPH)，样本中的甘胆酸浓度与NADPH的生成量成正比，通过340nm吸光值的变化即可计算出甘胆酸的含量。

甘胆酸(Cholyglycine,CG)是由胆酸和甘氨酸结合型的胆酸之一，当肝细胞受损时，肝细胞摄取胆酸能力下降，致使血中含量增加。甘胆酸测定是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一，也是检测胆汁郁积和早期酒精肝损伤的重要指标。同时，甘胆酸的检测对于诊断妊娠期肝内胆汁淤积症也具有重要的临床意义(王微,虞留明,朱学源.甘胆酸检测在肝胆疾病临床诊断中的意义[J].中华临床医师杂志,2014,8(15):2861-2865.)。

3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)是一种内源性的呋喃脂肪酸代谢产物，是主要的尿毒症毒素之一，属于蛋白结合类毒素。与非糖尿病个体相比，CMPF在妊娠糖尿病和2型糖尿病患者的血液中显著增加。Kacey Prentice等(Prentice K,Luu L,Allister E,et al.The Furan Fatty Acid Metabolite CMPF Is Elevated in Diabetesand InducesβCell Dysfunction[J].Cell Metabolism,2014,19(4):653-666.)实验研究表明CMPF可直接作用于β细胞，它通过有机阴离子转运蛋白3(OAT3)进入β细胞，一旦进入细胞，就会引起线粒体功能受损，减少葡萄糖诱导的ATP积累，并诱导氧化应激，导致关键转录因子失调，最终减少胰岛素的生物合成，继而造成糖尿病的产生。因此，CMPF水平的检测对于及早预防及检测糖尿病具有重要意义。