[发明专利]蝙蝠源轮状病毒基因组及筛选引物、扩增引物和扩增方法

权利要求书

1.蝙蝠源轮状病毒基因组VP3，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.蝙蝠源轮状病毒基因组VP6，其DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

3.蝙蝠源轮状病毒基因组VP7，其DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一种用于快速筛查蝙蝠源轮状病毒的引物对1，其上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物序列如SEQ ID NO.5所示。

5.权利要求4所述的引物对在快速筛查蝙蝠源轮状病毒中的应用。

6.一种蝙蝠源轮状病毒基因组扩增引物对，其特征在于：包括以下4对引物：

引物对2:VP3F1:SEQ ID NO.6；

VP3R1603:SEQ ID NO.7；

引物对3:VP3F1500:SEQ ID NO.8；

VP3R2591:SEQ ID NO.9；

引物对4：VP7F1：SEQ ID NO.10；

VP7R1062：SEQ ID NO.11；

引物对5:VP6F160：SEQ ID NO.12；

VP6R1356：SEQ ID NO.13。

7.一种蝙蝠源轮状病毒基因组扩增方法，分别以权利要求6所述的引物对2-5作为扩增的上下游引物，以蝙蝠样本中提取的轮状病毒RNA模板进行RT-PCR扩增，分别得到扩增引物，然后对扩增产物进行核酸测序，然后再拼接比对，得到蝙蝠源轮状病毒基因组VP3、VP7编码区序列和VP6部分编码序列。

8.根据权利要求7所述的蝙蝠源轮状病毒基因组扩增方法，其特征在于：所述的RT反转录反应体系为：含有5×RT缓冲液5μL，50μΜOligdT/Random Hexamer引物混合液2μL，10mMdNTPs 1.5μL，M-MLV Rtase/RNA Inhibitor混合液1μL，RNA模板7.5μL,加RNase-free H₂O8μL补足至25μL，反应条件：42℃水浴1h，75℃灭活10min。

9.根据权利要求8所述的蝙蝠源轮状病毒基因组扩增方法，其特征在于：所述的PCR反应体系为：5×PrimeSTAR GXL Buffer 5μl、2.5mM的dNTP Mixture 2μl、10μmol/L上游引物和10μmol/L下游引物各0.5μl、cDNA模板1μl、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 0.5μl，其余由双蒸水补足至25μL，其反应条件为：以引物对2作为引物的反应条件为：98℃预变性10s；65℃15s、68℃30s，共35个循环；以引物对3、4、5作为引物的反应条件为：98℃预变性10s；65℃15s、68℃90s，共35个循环。

10.权利要求6所述的引物对在扩增得到蝙蝠源轮状病毒基因组序列中的应用。