[发明专利]一种马铃薯黄化矮缩病毒RT-LAMP检测引物组及其应用

权利要求书

1.一种马铃薯黄化矮缩病毒RT-LAMP检测引物组，其特征在于，所述引物组由1对外侧引物F3/B3和1对内侧引物FIP/BIP组成，其核苷酸序列如下：

F3: 5’- GAGACAGAGAGTGGCATTGG-3’，

B3: 5’- ATTGCATCCACCGGAGTG-3’，

FIP: 5’- TGGTGCTTCTTCATTGGCACGT-ATGCAGATGGGAGGAGCC-3’，

BIP: 5’- CAGAAGAGAGCCACACCAGCA-GATGCTGTTCCGGATGTCC-3’。

2.一种利用权利要求1所述引物组检测马铃薯黄化矮缩病毒的RT-LAMP检测方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

（1）待测样品RNA提取；

（2）RT-LAMP反应体系的建立：25μL体系中含有10×Thermolpol 缓冲液2.5μL、8000U/mL 的Bst聚合酶1μL、10U/μL 的AMV反转录酶1μL、RNA模板2.5 μg、终浓度为1.2 mM的dNTPs、终浓度为6 mM的MgSO₄、终浓度为1.6 μM 的内侧引物FIP、终浓度为1.6 μM 的内侧引物BIP、终浓度为0.4 μM的外侧引物F3、终浓度为0.4 μM的外侧引物B3，余量为水；

（3）RT-LAMP反应条件：于实时浊度仪中进行反应，63°C恒温反应60min，80°C灭活5min结束反应；

（4）反应结果的测定：采用荧光染料目测观察法和/或实时浊度法进行测定；

采用荧光染料目测观察法：RT-LAMP反映结束后，在反应产物中加入1μL SYBR GreenI，反应产物为荧光绿色则表示结果为阳性，检测到马铃薯黄化矮缩病毒，反应产物为橙色则表示结果为阴性，未检测到马铃薯黄化矮缩病毒；

实时浊度法：浊度仪根据RT-LAMP扩增过程中生成的焦磷酸镁的沉淀量以数值的形式记录下来，然后根据数据制作成RT-LAMP扩增产物曲线图，以数据和曲线的形式来反映RT-LAMP扩增结果，浊度仪出现扩增曲线，则表示结果为阳性，反之为阴性。

3.如权利要求1所述的马铃薯黄化矮缩病毒RT-LAMP检测引物组在马铃薯黄化矮缩病毒监测、检测和鉴定上的应用。

4.如权利要求2所述的马铃薯黄化矮缩病毒的RT-LAMP检测方法在马铃薯黄化矮缩病毒的监测、检测和鉴定上的应用。