[发明专利]一种马铃薯黄化矮缩病毒RT-LAMP检测引物组及其应用

说明书

本发明公开了一种马铃薯黄化矮缩病毒RT‑LAMP检测引物组及其应用。用于检测马铃薯黄化矮缩病毒的LAMP引物组由1对外侧引物F3/B3和1对内侧引物FIP/BIP组成。本发明还提供了一种应用上述引物的马铃薯黄化矮缩病毒RT‑LAMP检测方法，其具体步骤包括：1）待测样品RNA提取；2）RT‑LAMP反应体系的建立；3）结果检测。本发明的RT‑LAMP反应体系在63℃等温条件下进行，通过1h温育便能快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检测到马铃薯黄化矮缩病毒。本发明不需要复杂仪器，能很好地满足对马铃薯黄化矮缩病毒的现场检测，在马铃薯黄化矮缩病毒监测、检测和鉴定上具重要的应用价值。

技术领域

本发明属于农作物病害检测、鉴定及防治技术领域，具体涉及一种马铃薯黄化矮缩病毒RT-LAMP检测引物组及其应用。

背景技术

马铃薯黄化矮缩病毒(Potato yellow dwarf virus，PYDV)属于弹状病毒组(Rhabdovirus)。马铃薯黄化矮缩病毒能侵染双子叶植物的茄科、菊科、十字花科等植物60余种，自然寄主有马铃薯、花烟草、山芥等。马铃薯黄化矮缩病毒分为SYDV和CYDV两个株系。马铃薯黄矮病毒为杆菌状粒体，在植物重切片大小约为380×75nm。病毒外膜由厚约3.5nm和间隔约5nm的三层构成。马铃薯黄化矮缩病毒可以通过马铃薯的种薯、介体、嫁接进行传播。传毒叶蝉从吸毒到传播需6~10天，病毒在虫体内可以存活50天之久。若虫、雌、雄成虫均能传毒，病毒还能在成虫体内越冬。

马铃薯黄化矮缩病毒的传播方式多种多样，最主要的方式就是通过马铃薯的种薯进行传播，其次还可以通过昆虫细菌等介体进行传播，再次嫁接过的植物也可以成为传毒的媒介。其中比较显著的昆虫介体有叶蝉，马铃薯黄化矮缩病毒可以在叶蝉的体内存活50天之久，并且叶蝉的若虫、雌虫、雄虫都可以传播该病毒，甚至还可以在叶蝉的成虫体内越冬。

马铃薯茎的生长点早期坏死，以及中期病株的矮缩症状甚至后期的黄化症状都是马铃薯黄化矮缩病毒导致的。植株上部的茎常开裂，由开裂处可看到茎节的髓部及皮层有锈色斑点，有时节间的髓部及皮层也出现锈斑。在被马铃薯黄化矮缩病毒感染过的植株会出现节间缩短的现象，这种症状会引起丛枝现象。小叶通常卷曲, 但有时也皱缩, 块茎小而少，块茎与茎部的距离很近，有时块茎也开裂。块茎的髓部及韧皮部有锈色或褐色的斑点，维管束很少变色。在田间生产中，变色斑有时会出现在刚收获不久的马铃薯块茎上，但是马铃薯矮缩病毒一般不会侵染马铃薯块茎的端部。

目前，防控马铃薯病毒病危害的化学药剂还比较少，所以脱毒的种苗和种薯成了防治病毒病比较有效的办法。因此，高效可靠的病毒检测方法是保证马铃薯品质和质量的关键。目前，广泛应用于马铃薯病毒检测的方法主要为：血清学方法和分子生物学方法。近年来分子生物学检测技术发展迅速，分子生物学检测技术有高效、特异性强和灵敏性高等优点，被广泛的应用于马铃薯病毒检测中，其中应用最多的为反转录-聚合酶链式反应，为马铃薯病毒及脱毒种苗的检测提供了更为简便，准确的诊断方法。这为马铃薯病毒病的预防、控制和检测提供了重要的参考。