[发明专利]一种艾本那肽前体中三乙胺残留的GC检测方法

说明书

本发明公开了一种艾本那肽前体中三乙胺残留的GC检测方法，它包括溶剂配制，样品制备，对三乙胺对照品溶液、系统适用性溶液及供试品溶液分别进行GC检测，检测条件为：6%氰丙基‑苯基‑甲基聚硅氧烷填充的色谱柱，柱温：35～45℃，载气：氮气，流速：2.5～3.5ml/min，检测器：FID。本发明可准确有效的对艾本那肽前体中三乙胺残留进行定量，本发明操作简便，检测成本低，灵敏度高，精确度高，准确可靠，三乙胺定量限为2ppm，远低于三乙胺限度1000ppm。检测结果能够满足检测质量结果判定，适用于实验室检测和企业产品质量控制，可用于艾本那肽前体中三乙胺残留的检测。

技术领域

本发明涉及艾本那肽前体中三乙胺残留的检测方法。

背景技术

GLP-1是一种人体内存在的肽激素，通过环磷酸腺苷或其他细胞内信号传导机制与其他调节系统协同发挥作用，诱导胰岛素分泌、刺激胰岛素生物合成、抑制胰高血糖素分泌、延迟胃排空、并且减少摄食量，同时对胰腺产生滋养作用。

作为GLP-1类似物，Exendin-4可通过GLP-1受体诱导产生与GLP-1类似的生理学作用，但比GLP-1更加强效，作用持续时间更长。

艾本那肽前体是一种经过合成修饰的Exendin-4，通过与重组人血白蛋白相结合，避免了快速降解和快速肾清除，因此延长了作用持续时间，并具有与Exendin-4类似的生理作用和作用机制。

在艾本那肽前体的纯化过程中，使用三乙胺作为流动相。三乙胺对发育有影响，具有生殖毒性，故需对艾本那肽前体中的三乙胺残留进行控制。

由于艾本那肽前体使用三氟乙酸进行沉淀，造成艾本那肽前体的水溶液成酸性。三乙胺与三氟乙酸成盐，造成三乙胺无法准确检出。

发明内容

本发明提供一种仅通过普通的高效气相色谱仪便可实现艾本那肽前体中三乙胺残留检测的方法。

为实现本发明目的，这种艾本那肽前体中三乙胺残留的GC检测方法其特征在于包括以下步骤：

a. 溶液制备

①对照品贮备溶液：将三乙胺加入0.08M～0.1M氢氧化钠水溶液制得浓度为9～11mg /ml的三乙胺对照品贮备溶液，备用；

②对照品溶液：取三乙胺对照品贮备溶液加入0.08M～0.1M氢氧化钠水溶液制得浓度为0.9～1.1mg /ml的三乙胺对照品溶液，备用；

③系统适用性溶液：在艾本那肽前体0.1g中加入5ml三乙胺对照品溶液溶解后摇匀，备用；

④供试品溶液：在艾本那肽前体0.1g中加入0.08M～0.1M的氢氧化钠水溶液5ml溶解后摇匀，备用；

b. GC检测色谱条件

色谱柱：采用6%氰丙基-苯基-甲基聚硅氧烷为填充剂的色谱柱；内径为0.20～0.53mm，柱长25～75m，膜厚1.12～3μm；

柱温：35～45℃；

载气：氮气；

流速：2.5～3.5ml/min；

检测器：FID；

进样口温度：120～180℃；

分流比：20:1～30:1；

检测器温度240℃～280℃；

顶空条件：顶空平衡温度75℃～85℃；

顶空平衡时间：25～35min；