[发明专利]处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法

权利要求书

1.一种处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法，其特征在于：

（1）活化培养：将蜡状芽孢杆菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、地衣芽孢杆菌菌悬液以菌数比1:1:1~1:2:3混合后接入活化培养基中，控制培养液体积装液量15~25%，活化培养温度为32~36℃，pH为7.0~7.5，转速为160~200 r/min；活化培养24~48h后，获得种子液；

（2）发酵培养：以5~8%的体积接种量将步骤（1）种子液接种于发酵培养基中，发酵培养温度为32~37℃，pH为7.0~7.5，转速为160~200 r/min；发酵培养24~48h后，离心收集芽孢，干燥；

（3）复合缓释微胶囊制备：①将乳清蛋白溶液在70~90℃下加热20~30min使其变性，冷却至室温；②将培养得到的芽孢加入变性乳清蛋白溶液中，使芽孢在变性乳清蛋白溶液中的质量分数为2%~5%，加入大豆油，随后按乳清蛋白溶液体积量添加 CaCl₂和葡萄糖酸内酯分别为0.05~0.2 g/L和2.0~5.0g/L的量，在30~50℃下加热4~6小时并以600~800 r/min搅拌；离心过滤得到微胶囊；其中大豆油的体积加入量为含芽孢的变性乳清蛋白溶液体积的1~5倍；离心转速为6000~8000 r/min，离心时间为 5~10min；③将得到微胶囊与海藻酸钠溶液搅拌混合均匀后，过滤收集浸润后的微胶囊，将其重悬于含0.05~0.2 mol/L CaCl₂的大豆油中后搅拌，过滤收集微胶囊，并用去离子水清洗以除去油相；其中微胶囊质量与海藻酸钠溶液体积比为1:5~1:15g/ml；搅拌混合均匀的转速为180~200 r/min，搅拌时间20~30min；悬于大豆油中后搅拌速度为400~500 r/min，搅拌时间为20~30min。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中活化培养基成分为(g/L)：葡萄糖5.0~10.0、蛋白胨5.0~10.0、牛肉膏2.0~5.0、NaCl5.0~10.0。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中发酵培养基成分为(g/L)：葡萄糖5.0~10.0、蛋白胨5.0~10.0、牛肉膏5.0~8.0、NaCl 3.0~5.0、MgSO₄·7H₂O 1.0~2.0、K₂HPO₄·3H₂O 1.0~3.0、(NH₄)₂SO₄ 3.0~5.0、维生素VH 1.0~2.0；6000~8000r/min离心15~20min获芽孢，70~100℃鼓风机干燥。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3) 的步骤①中乳清蛋白质量浓度为5%~10%；步骤(3)的步骤③中海藻酸钠溶液质量浓度为0.5%~2%。