[发明专利]处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法

说明书

本发明公开了处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法，主要应用于水产养殖中水体氨氮处理。以蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的芽孢为芯材，以乳清蛋白和海藻酸钠为壁材，制得双层包衣微胶囊，包埋率达到90％。本产品应用于水产养殖，主要作用为净化养殖水体氨氮，拮抗病原菌，提高养殖水产品免疫力，预防疾病发生，使用周期达50天以上。

技术领域

本发明涉及生物技术和微生态制剂领域。尤其涉及一种处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法。

背景技术

水产养殖过程中，大量剩余饵料和养殖动物排泄物在水体中积累，使水体环境恶化，包括氨氮和亚硝酸盐含量增加，溶解氧降低等，导致养殖动物病害频发，经济效益降低。因此养殖水环境控制是水产养殖的重中之重。微生态制剂是利用有益微生物加工而成的活菌制剂，在水产养殖中具有调控水质、拮抗病原菌、提高免疫力的作用。常用的益生菌主要有光合细菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌等。

微胶囊技术是利用具有能够成膜的天然的或人工合成的高分子材料做为壁材，包覆芯材即功能性成分形成微胶囊，可以达到缓控释的作用。微胶囊的其他作用还有减少有效成分受外界环境影响，掩蔽芯材的不良气味，改善芯材的稳定性、流动性等性质，减少芯材在环境中的蒸发速率。利用微胶囊技术制备可处理水体氨氮的缓释复合微生态制剂，可以有效保护活菌，将其与恶劣环境隔绝，从而加快水体氨氮的去除效率。同时，增加制剂的持效期、稳定性，减少用量，以解决目前水产养殖用微生态制剂投料浓度受限、菌种受高氨氮养殖污水影响和制剂稳定性差、作用效果弱的问题。

发明内容

本发明的目的是针对水产养殖过程中水体氨氮增加，影响水生动物生存的问题，而提供一种处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法。本法得到的微胶囊制剂能够解决活菌在恶劣水体环境中存活力不强，作用时间短，作用效果弱的问题。

本发明的技术方案为：一种处理养殖水体氨氮的复合缓释微胶囊制剂的制备方法，其特征在于：

(1)活化培养：将蜡状芽孢杆菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、地衣芽孢杆菌菌悬液以菌数比1:1:1～1:2:3混合后接入活化培养基中，控制培养液体积装液量15～25％，活化培养温度为32～36℃，pH为7.0～7.5，转速为160～200r/min；活化培养24～48h后，获得种子液；

(2)发酵培养：以5～8％的体积接种量将步骤(1)种子液接种于发酵培养基中，发酵培养温度为32～37℃，pH为7.0～7.5，转速为160～200r/min；发酵培养24～48h后，离心收集芽孢，干燥；

(3)复合缓释微胶囊制备：①将乳清蛋白溶液在70～90℃下加热20～30min使其变性，冷却至室温；②将培养得到的芽孢加入变性乳清蛋白溶液中，使芽孢在变性乳清蛋白溶液中的质量分数为2％～5％，加入大豆油，随后按乳清蛋白溶液体积量添加CaCl₂和葡萄糖酸内酯分别为0.05～0.2g/L和2.0～5.0g/L的量，在30～50℃下加热4～6小时并以600～800r/min搅拌；离心过滤得到微胶囊；③将得到微胶囊与海藻酸钠溶液搅拌混合均匀后，过滤收集浸润后的微胶囊，将其重悬于含0.05～0.2mol/L CaCl₂的大豆油中后搅拌，过滤收集微胶囊，并用去离子水清洗以除去油相。

优选步骤(1)中活化培养基成分为(g/L)：葡萄糖5.0～10.0、蛋白胨5.0～10.0、牛肉膏2.0～5.0、NaCl5.0～10.0。