[发明专利]基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法

权利要求书

1.一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法，其特征在于该分析方法以含有修饰发卡DNA1的金纳米粒子Au-DNA1、双链DNA识别探针DNA2/DNA3、单链DNA识别探针DNA4和核酸内切酶Nt.BbvCI的溶液为检测溶液，当靶标蛋白存在时，通过蛋白-适配体识别方式，被DNA2/DNA3和DNA4夹心识别，基于邻位效应，DNA4取代DNA2与DNA3杂交，释放的DNA2与Au-DNA1杂交，激活酶切位点，引发Nt.BbvCI对DNA1的酶切，使得标记在DNA1上的荧光染料远离金纳米粒子表面恢复荧光，同时，DNA2被再次释放并引发第二轮酶剪，如此循环，放大荧光信号，实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA1上标记有荧光染料，由于DNA1的发卡结构，荧光染料接近金纳米粒子表面，荧光处于猝灭状态。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA3含有两个功能片段，分别是能特异性识别靶标蛋白的适配体片段和能与DNA2杂交的核酸片段。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA4含有两个功能片段，分别是能特异性识别靶标蛋白的适配体片段和能邻位取代DNA2与DNA3杂交的核酸片段。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述的DNA2能与DNA1杂交形成能被Nt.BbvCI酶切的DNA2/DNA1双链。

6.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于如下检测步骤：

(1)将样品和检测溶液混合，37℃温育60分钟，用荧光光谱仪测荧光强度；

(2)利用标准曲线法，求出样品中靶标蛋白的浓度。