[发明专利]一种抗犊牛大肠杆菌F41菌毛抗原高免卵黄抗体IgY的制备方法及应用

说明书

本发明涉及农业技术领域，具体地涉及一种抗犊牛大肠杆菌F41菌毛抗原高免卵黄抗体IgY的制备方法及应用；包括以下步骤：(1)致病菌的分离鉴定；(2)菌毛基因鉴定筛选；(3)菌毛抗原提取纯化；(4)卵黄无菌分离；(5)抗体纯化。本发明思路清晰，利用犊牛大肠杆菌F41菌毛为抗原，免疫产蛋鸡，使产蛋鸡产生抗菌毛的抗体，收集高免蛋分离卵黄，从卵黄中提取抗体即为高免卵黄抗体(IgY)，然后应用于犊牛大肠杆菌病的治疗和预防。

技术领域

本发明涉及农业技术领域，特别是涉及一种抗犊牛大肠杆菌F41菌毛抗原高免卵黄抗体IgY的制备方法及应用。

背景技术

犊牛大肠杆菌是一种常发的细菌性传染病，犊牛发病后有较高的死亡率。致病性大肠杆菌血清型较多，给本病的预防带来困难，一般的治疗都选择抗生素，但是抗生素在治疗过程中往往会发生耐药性现象，或者造成犊牛肠道有益菌群的破坏而贻误治疗。尤其是禁抗令的颁布实施，使临床上能够应用的抗生素的种类越来越少，这又给犊牛大肠杆菌病的治疗带来困难。

动物一般在病原微生物(抗原)的刺激下，机体的特异性免疫应答一般可分为三个阶段：(1)感应阶段：是抗原处理、呈递和识别的阶段；(2)反应阶段：是B细胞、T细胞增殖分化，以及记忆细胞形成的阶段；(3)和效应阶段：效应T细胞、抗体和淋巴因子发挥免疫效应的阶段。如果某些病原体突破了第一道和第二道防线，即进入动物体并生长繁殖，引起感染。有的有症状，就是患病；有的没有症状，称作隐性感染。不论是哪一种情况，机体都经历了一次与病原体斗争的过程，这种专门针对某一种病原体(抗原)的识别和杀灭作用称为特异性免疫。譬如得过大肠杆菌病的动物对大肠杆菌有持久的免疫力，那是因为大肠杆菌刺激机体产生免疫应答，增加了巨噬细胞的吞噬功能，同时在体内还产生抗大肠杆菌的抗体。人体的免疫系统又能把大肠杆菌这个“敌人”的特征长期“记忆”下来，如果再有大肠杆菌进入，就会很快被识别、被消灭。能进行免疫应答的免疫细胞有很多种，最重要的是淋巴细胞。它又分成两种。两种细胞的发育成熟过程不一样，一种是在胸腺内发育成熟，称作T淋巴细胞，是在骨髓内发育成熟的为B淋巴细胞。B淋巴细胞受病原体刺激后，引起一系列变化，最终转化成为能产生抗体的浆细胞，所产生的抗体通过各种方式来消灭病原体，如溶解病原体，中和病原体产生的毒素，凝集病原体使之成为较大颗粒让吞噬细胞吞食消灭。浆细胞产生的抗体存在于机体的血液和体液中，这种免疫反应就称为体液免疫。

卵黄抗体IgY是指存在于禽蛋黄中的免疫球蛋白，是禽类为了保护其后代在新生期不受外界环境的病原微生物侵袭而产生的特殊抗病机制。近年来，国内外学者对IgY在动物腹泻防制方面进行了广泛研究，并证明了IgY能有效防制动物腹泻，且特异性IgY使用方便、无残留、不会导致细菌耐药性，应用前景广阔。抗动物大肠杆菌高免卵黄抗体IgY提取的纯度不够高；大肠杆菌血清型复杂多样，针对血清型的IgY对致病性的大肠杆菌覆盖性不高；接种后的动物易产生抗IgY动物大肠杆菌高免卵黄抗体的抗体，重复使用效果降低。

大肠杆菌致病主要通过黏附素(菌毛)吸附肠黏膜细胞，如果能够阻断大肠杆菌吸附宿主细胞就能够控制大肠杆菌对宿主的感染。由于大肠杆菌病对于养殖业会造成巨大经济损失，且目前全世界范围内养殖业的无抗生素养殖的流行趋势，国家对于养殖业抗生素使用的限制，耐药的超级细菌的迅速增加，挖掘出高纯度的可以治疗和预防临床犊牛感染大肠杆菌腹泻病的卵黄抗体IgY对于养殖业具有很大价值。

发明内容

本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种抗犊牛大肠杆菌F41菌毛抗原高免卵黄抗体IgY的制备方法及应用，抗动物大肠杆菌高免卵黄抗体IgY能够高效、无副作用、无耐药性的治疗和预防动物大肠杆菌病。

解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明设计了一种抗犊牛大肠杆菌F41菌毛抗原高免卵黄抗体IgY的制备方法，包括以下步骤：

(1)致病菌的分离鉴定；

(2)菌毛基因鉴定筛选；