[发明专利]一种光致电化学传感器检测瘦肉精雷托帕明的方法有效
申请号: | 201910192182.X | 申请日: | 2019-03-14 |
公开(公告)号: | CN109813774B | 公开(公告)日: | 2021-02-19 |
发明(设计)人: | 混旭;王珊珊;张跃;赵继宽;钟华 | 申请(专利权)人: | 青岛科技大学 |
主分类号: | G01N27/26 | 分类号: | G01N27/26;G01N27/327 |
代理公司: | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人: | 雷斐 |
地址: | 266000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 致电 化学 传感器 检测 瘦肉精 雷托帕明 方法 | ||
1.一种光致电化学传感器的制备方法,其特征包括如下步骤:
(1)g-C3N4/CuPPcs的合成
A、称取12g尿素于坩埚中,以5℃/min的升温速率,在550℃下煅烧4h;加热结束后,将坩埚自然冷却至室温,并将所得的产物g-C3N4收集,捻碎成粉末,供进一步使用;
B、在反应釜中加入0.24g的CuCl2·2H2O、1.00g的1,2,4,5-苯四甲腈、0.076g的(NH4)2Mo2O7和3.50g的尿素,在200℃下加热5h;加热完毕后自然冷却至室温,将反应物分别用超纯水、丙酮、甲醇清洗数次;真空干燥后,再分别用丙酮、甲醇和三氯甲烷回流12h;然后将得到的固体吸滤后得到聚合酞菁铜CuPPcs;将g-C3N4粉末和CuPPcs组成的一定量混合物分散在水中,在超声波下混合2h,得到g-C3N4/CuPPcs;
(2)3D DNA的合成
将四条DNA单链P1、P2、P3、P4一起溶解在10mM的Tris-盐酸含50mM的MgCl2 pH8.0缓冲液中,得终浓度分别为50μM的DNA混合溶液;随后,将得到的混合物在95℃下加热2min,然后立即冷却至4℃,得到3D DNA结构;
(3)捕获复合物CP的制备
将OB、SB、LB各5ng放置于200μL的3D DNA结构溶液中,37℃下反应30min,得捕获复合物CP,4℃保存备用;
(4)探针probe的制备
用柠檬酸钠法制备粒径为20nm的胶体金溶液;将100nM的pDNA和AuNPs溶液混合,形成体积为200μL混合溶液,在37℃下在摇床中孵育24h;然后在15000rpm的转速下离心30min,将沉淀重新分散在200μL的超纯水中;将制备出的pDNA/AuNPs复合物标记为探针probe;
(5)g-C3N4/CuPPcs/GE电极的制备
在每步修饰电极之前,裸金电极进行预处理:分别用1.0、0.3和0.05μm的氧化铝进行抛光,然后分别在无水乙醇和超纯水中超声5min,备用;将上述制备的20μL浓度为1mg/mL的g-C3N4/CuPPcs溶液均匀滴涂在处理好的GE的表面,在自然环境下干燥;将干燥后的修饰电极记为g-C3N4/CuPPcs/GE;
(6)probe/g-C3N4/CuPPcs/GE的制备
将制备的40μL的探针滴涂在准备好的g-C3N4/CuPPcs/GE表面,记为probe/g-C3N4/CuPPcs/GE,得光致电化学传感器;
所述的DNA部分序列为:
Aptamer AGTTAATCACTTGCCATACTAGTTTTGAAAATCATCTCTG
C GATTAACTCAGAGATGATTTTCAAAACTAGTATGGCAAGT
OB GCATCCACATCCTTTC
SB CAGAGATGATTTTCAAAACTAGTATGGCAAGTTCCCTTATACTACATACACC
LB GGATGCGGGAACTTGCCATACTAGTTTTGAAAATCATCTCTGAGTTAATC
F CAGAGATGATTTTCAAAACTAGTATGGCAAGTTCCCGCATCC
pDNA GGTGTATGTAGTATAA
P1 ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTAGCTCAGGATGCGGGAACTTGCCATACTAGTTTTGA AAATCATCTCTGA GTTAATC
P2 TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATAC
P3 TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCAT
P4 TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC
以上序列从左到右为5’到3’方向。
2.一种利用权利要求1所述方法制备的光致电化学传感器检测瘦肉精雷托帕明的方法,包括如下步骤:
取100μL雷托帕明样品溶液,加入到200μL浓度为1μM的由适体DNA和C链组成的双链DNA溶液中,37℃下反应30min;再将所述(3)所得的100μL CP溶液、浓度为1μM的燃料F溶液加入,37℃下反应120min;再把所述(6)制得的probe/g-C3N4/CuPPcs/GE插进溶液中进行孵育,室温下反应0.5h;随后将电极拿出并冲洗再进行光致电化学检测;
光致电化学检测:光致电化学检测是在室温下条件下进行的,电解液是含有1μM多巴胺的0.1M的pH 7.4磷酸缓冲溶液,其中多巴胺作为电子供体增加电子转移的数量;白LED灯作为激发光源,每10s开一次;设置的偏压是0.1V;有目标物瘦肉精雷托帕明存在时产生信号I,没有目标物瘦肉精雷托帕明存在时产生信号I0,以I-I0为分析信号,进行雷托帕明的测定。
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