[发明专利]一种巨噬细胞极化抑制剂及其应用在审
| 申请号： | 201910193246.8 | 申请日： | 2019-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN109929803A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 吕坤;李雪琴;杨辉 | 申请（专利权）人： | 皖南医学院第一附属医院（皖南医学院弋矶山医院） |
| 主分类号： | C12N5/0786 | 分类号： | C12N5/0786 |
| 代理公司： | 合肥信诚兆佳知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34159 | 代理人： | 梁维尼 |
| 地址： | 241004*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 巨噬细胞 极化抑制 极化 生物技术领域 应用 异常甲基化 关键作用 理论数据 试剂盒 抑制剂 介导 研究 | ||
1.一种巨噬细胞极化抑制剂Dnmt3aos，其序列号如表1所示。
2.一种包含有权利要求1所述抑制剂Dnmt3aos的试剂盒。
3.一种巨噬细胞极化抑制剂Dnmt3aos的应用，包含以下步骤，其步骤如下：
S1:体外制备了M1和M2巨噬细胞
从BALB/c小鼠的股骨和胫骨中分离获得骨髓细胞，在L929条件培养基诱导下诱导成BMDM，并用LPS和IFN-γ刺激获得M1，利用IL-4刺激获得M2巨噬细胞；然后运用基因芯片技术，选择具有至少两倍表达差异并且P值<0.05的差异lncRNAs的巨噬细胞。
S2:检测Dnmt3aos在巨噬细胞的表达
分别提取BMDM细胞的细胞核和细胞质RNA，利用RT-qPCR技术检测Dnmt3aos在核质中的表达水平。
S3:Dnmt3aos在巨噬细胞再极化实验
分别用LPS/IFN-γ和IL-4处理S1步骤中具有M1和M2表型的巨噬细胞，使其重新极化为M2和M1表型，然后检测M1/M2巨噬细胞中的iNOS和Arg1标志基因的表达情况。
S4:Dnmt3aos表达与巨噬细胞极化实验
利用S3步骤中被Dnmt3aos极化的巨噬细胞，检测Dnmt3aos在巨噬细胞当中的Dnmt3aos的表达；
利用siRNA分别抑制Dnmt3aos和Dnmt3a的表达，运用RT-qPCR和WB技术分别检测巨噬细胞中Dnmt3aos和Dnmt3a的基因以及蛋白表达。
S5:1.Dnmt3aos的体外功能实验
利用siRNA抑制巨噬细胞中Dnmt3aos的表达，然后结合M1/M2巨噬细胞体外极化模型来观察Dnmt3aos在巨噬细胞极化中的功能。
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