[发明专利]一种改良嵌合抗原受体T细胞的制备及其应用在审
| 申请号： | 201910196890.0 | 申请日： | 2019-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN109722420A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 张志杰;聂文冰;刘永军;尹鸿萍 | 申请（专利权）人： | 江苏艾洛特医药研究院有限公司;江苏艾洛特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知识产权代理有限公司 11467 | 代理人： | 王斌 |
| 地址： | 211112 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嵌合抗原 慢病毒 改良 制备 肿瘤 细胞免疫治疗 实验步骤 实验过程 特异靶向 制备过程 杀伤 体外 转导 应用 增殖 病毒 细胞 改造 | ||
1.一种改良嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于：在T细胞在病毒转导过程中，将含有IL-7、IL-15和 CAR三种慢病毒同时转导入T细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的方法由如下步骤实现：
（1）采集健康人外周血，经密度梯度分离获得外周血单个核细胞，分选后获得纯化的T细胞；
（2）T细胞激活后，取出IL-7、IL-15和 CAR三种慢病毒进行离心共转导，随即吸弃病毒上清，更换培养液继续培养；
（3）将步骤（2）转导后的T细胞进行流式分析，培养后即得到改良的嵌合抗原受体T细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的分选方法采用磁珠阴性分选法。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述的T细胞激活技术是采用anti-CD3/anti-CD28偶联的磁珠进行激活，激活时采用的磁珠与T细胞的加入比例为1:1~3:1。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（2）中离心共转导，采用的离心转速为2000-3000 rpm，离心时间为1-3 h。
6.根据权利要求1-2所述得的方法，其特征在于步骤（3）中于转导后48h进行流式分析转导效率。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于：所述的IL-7慢病毒的MOI为5-25，IL-15慢病毒的MOI为5-25，CAR慢病毒的MOI为5-25。
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