[发明专利]针对目标核酸靶标的探针的制备方法

权利要求书

1.针对目标核酸靶标的探针的制备方法，其特征在于，包括：

a) 获取感兴趣的靶DNA序列；

b）使用转座酶，将所述靶DNA序列进行片段化的同时，在片段化的DNA序列两端加上接头序列；和

c) 利用所述接头序列，获取所述片段化的DNA序列，以产生探针。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的靶DNA序列为从初始序列中排除掉不想要的序列的区域得到。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中所述不想要的序列的区域选自重复序列、保守序列、富含GC的序列或富含AT的序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述排除的方法为扩增所述感兴趣的靶DNA序列。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述不想要的序列的区域至少为100bp。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转座酶选自Tn1、Tn2、Tn3、Tn4、Tn5、Tn6、Tn7、Tn9、Tn10、Tn551、Tn971、Tn916、Tn1545、Tn1681、Tgf2、Tol2、Himar1以及HARBI1中的一种或任意多种的组合。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针是标记的。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述标记选自荧光团、比色标记、量子点、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸、非天然核酸以及纳米结构；

所述纳米结构包括无机纳米颗粒、NV-center、聚集/组装诱导发光分子、稀土离子配体分子、多金属氧簇。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤c）中，产生探针的方法包括扩增、克隆、合成或其组合。

10.根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，在步骤c）中，产生探针的方法为利用能够结合所述接头序列的引物扩增所述片段化的DNA序列。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述引物是标记的。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述标记选自荧光团、比色标记、量子点、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸、非天然核酸以及纳米结构；

所述纳米结构包括无机纳米颗粒、NV-center、聚集/组装诱导发光分子、稀土离子配体分子、多金属氧簇。

13.进行杂交测定的方法，其包括利用权利要求1~12任一项所述的方法产生探针，并将靶核酸与所述探针接触。

14.根据权利要求13所述的杂交测定的方法，其特征在于，所述杂交测定为原位杂交。

15.根据权利要求14所述的杂交测定的方法，其特征在于，所述原位杂交为将所述探针与固定的目的细胞进行3D FISH标记。