[发明专利]一种纳米硒益生菌冻干粉及其制备方法

权利要求书

1.一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、菌种活化，将嗜酸乳杆菌接种在MRS液体培养基中，厌氧培养、活化，得到活化后的嗜酸乳杆菌；将嗜热链球菌接种在MRS液体培养基中，厌氧培养、活化，得到活化后的嗜热链球菌；将双歧杆菌接种在MRS液体培养基中，厌氧培养、活化，得到活化后的双歧杆菌；

步骤2、纳米硒转化，将活化后的嗜酸乳杆菌接种在含有亚硒酸钠的MRS液体培养基中厌氧培养，得到嗜酸乳杆菌发酵醪液；将活化后的嗜热链球菌接种在含有亚硒酸钠的MRS液体培养基中厌氧培养，得到嗜热链球菌发酵醪液；将活化后的双歧杆菌接种在含有亚硒酸钠的MRS液体培养基中厌氧培养，得到双歧杆菌发酵醪液；

步骤3、富纳米硒益生菌复配，将步骤2中得到的嗜酸乳杆菌发酵醪液、嗜热链球菌发酵醪液及双歧杆菌发酵醪液混合，得到混合发酵醪液；

步骤4、纳米硒益生菌的收集，将步骤3中的混合发酵醪液，离心分离得到益生菌沉淀，将益生菌沉淀洗涤、离心后，得到湿菌粉；

步骤5、纳米硒益生菌冻干粉制备，将步骤4中的湿菌粉冻干处理，得到纳米硒益生菌冻干粉。

2.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤1中菌种活化时，厌氧培养的温度为32-37℃；菌种活化采用连续活化2-3次，第一次活化培养的时间为24-48h，其余活化培养时间为12-16h。

3.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤2中活化后的嗜酸乳杆菌的接种量为1-3％，活化后的嗜热链球菌接种的接种量为1-3％，活化后的双歧杆菌的接种量为1-3％。

4.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤2中将活化后的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌接种在含有浓度为30-60mmol/L亚硒酸钠的MRS液体培养基中厌氧培养；将活化后的双歧杆菌接种在含有浓度为15-30mmol/L亚硒酸钠的MRS液体培养基中厌氧培养。

5.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤2中厌氧培养的温度为32-37℃，厌氧培养时间为48-72h。

6.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤3中混合发酵醪液中嗜酸乳杆菌发酵醪液、嗜热链球菌发酵醪液及双歧杆菌发酵醪液的体积比为(1-2):(1-3):(1-4)。

7.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤4中混合发酵液采用高速冷冻离心机离心，离心时间为10-15min，转速为8000-10000r/min。

8.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤4中益生菌沉淀采用无菌生理盐水悬浮洗涤、离心；离心时间为10-15min，转速为8000-10000r/min。

9.根据权利要求1所述的一种纳米硒益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤5中湿菌粉冻干处理时，首先采用预冻，然后在真空条件下冷冻干燥24-36h；冻干处理前在湿菌粉中加入冷冻保护剂；按质量百分数计，冷冻保护剂采用低聚木糖10-14％、菊糖5-7％、碳酸氢钠0.8-1％。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的纳米硒益生菌冻干粉的制备方法制备得到的纳米硒益生菌冻干粉。