[发明专利]一种全预混CYP2C9和VKORC1多重PCR基因多态性检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测的检测引物及其相应探针，其特征在于所述检测引物及探针根据CYP2C9基因c.1075位点(A/C)多态性设计，序列如下所示：

反向引物：

CYP2C9 1075A: 5’- CAGGCTGGTGGGGAGAAGGTCCAT-3’；

CYP2C9 1075C: 5’- CAGGCTGGTGGGGAGAAGGTCCAG-3’；

正向引物：

CYP2C9 1075F: 5’- AAGTCCAGGAAGAGATTGAACGT-3’；

荧光探针：

TM-CYP2C9 1075: 5’荧光基团-TGCAAGACAGGAGCCACATGCCCTA-3’淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测的检测引物及其相应探针，其特征在于所述检测引物及探针根据VKORC1基因-1639位点(G/A)多态性设计，序列如下所示：

反向引物：

VKORC1 1639G: 5’-TAGGCGTGAGCCACCGCATCC-3’；

VKORC1 1639A: 5’-TAGGCGTGAGCCACCGCATCT-3’；

正向引物：

VKORC1 1639F: 5’- AGCAGGAGAGGGAAATATCACAGA-3’；

荧光探针：

TM-VKORC1 1639: 5’荧光基团- CCAGAGGAAGAGAGTTCCCAGAAGGGT-3’淬灭基团。

3.根据权利要求1所述的一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测的内控引物对及相应荧光探针，其特征在于所述内控引物对及相应荧光探针的序列如下所示：

内控引物对：

正向引物：GAPDH F: 5’- CTTAGATTTGGTCGTATTGGGC-3’；

反向引物：GAPDH R: 5’-GAGCTCACCATGTAGCACTCAC-3’；

内控荧光探针：

TM-GAPDH: 5’荧光基团-TGCCATCAATGACCCCTTCATT-3’淬灭基团。

4.根据权利要求1所述的一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测试剂盒的修饰反应酶和含二聚糖成分的PCR缓冲液预混方式。

5.如权利要求1-3所述的引物对及相应荧光探针，其特征在于所述荧光探针5’端的荧光基团为FAM、TET、VIC、HEX或ROX，3’端的淬灭基团为BHQ -1、BHQ -2、Dabcyl、Eclipse、或TAMRA。

6.一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括权利要求1所述的检测引物及其相应探针和/或括权利要求2所述的检测引物及其相应探针。

7.如权利要求6所述的一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括如权利要求3所述内控引物对及相应荧光探针。

8.一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性的检测方法，所述方法包括使用权利要求1和/或权利要求2所述的引物及探针。

9.如权利要求8所述的一种全预混华法林相关CYP2C9*3型和VKORC1多重引物特异性PCR基因多态性的检测方法，其特征在于所述方法还包括使用权利要求3所述的引物及探针。