[发明专利]一种斯氏普罗威登斯菌酶剂的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910204712.8 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109825492A | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 吴小毛;张承;李荣玉;龙友华;李姣红;王秋萍;黄文源;代园凤 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N11/10 | 分类号： | C12N11/10;C12N9/00;A01N25/32;C09K17/14;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/38 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李余江;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 斯氏普罗威登斯菌 降解酶 制备 酶剂 植物体 应用 超声破碎 高效降解 环境友好 大白菜 菌核净 菌悬液 速效性 异菌脲 菌酮 菌种 扩繁 生菜 马铃薯 番茄 韭菜 黄瓜 水体 辣椒 油菜 烟草 土壤 | ||
1.一种斯氏普罗威登斯菌酶剂的制备方法，其特征在于：其以斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartii为菌种，以海藻酸钠为固定化材料，经菌悬液扩繁和降解酶剂超声破碎提取制备而得斯氏普罗威登斯菌降解酶剂。
2.根据权利要求1所述的斯氏普罗威登斯菌酶剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)菌悬液制备：无菌条件下加入无菌磷酸盐缓冲液于菌种培养皿中平行振荡，并用接种环轻轻刮落培养基表面的菌落，即成粗制菌悬液，将其转移到液体发酵培养基中在pH为7～8，30～35℃，150～200rpm条件下培养48h；将取出的发酵液立即在8000～10000r/min，3～4℃下离心10～15min，收集湿菌体，并用无菌磷酸盐缓冲液冲洗3次；然后将无菌磷酸盐缓冲液与湿菌体混匀，控制菌体数量为≥6×1010cfu/mL，制得的菌悬液3～4℃保存备用。
2)降解酶剂提取制备：对步骤1)制得的菌悬液进行超声破碎提取游离酶，超声破碎时间10～15min，功率320W，每10s一个周期；破碎液在8000～10000r/min，3～4℃下离心10～15min，得上清液即制得降解酶剂；上清液游离酶含量控制在大于等于2.80mg/mL。
3.一种如权利要求1或2的方法制备的斯氏普罗威登斯菌酶剂的应用，其特征在于：所述斯氏普罗威登斯菌酶剂应用于高效降解包括油菜、大白菜、紫菜苔、生菜、韭菜、黄瓜、番茄、辣椒、马铃薯、烟草在内的植物体中以及土壤和水体中的菌核净。
4.一种如权利要求1或2的方法制备的斯氏普罗威登斯菌酶剂的应用，其特征在于：所述斯氏普罗威登斯菌酶剂应用于高效降解植物、土壤和水体中的烯菌酮和异菌脲。
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