[发明专利]一种洋白蜡花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法

权利要求书

1.一种洋白蜡花粉变应原蛋白Fra p 1，其特征在于，所述Fra p 1 的氨基酸序列如SEQ ID NO.4 所示。

2. 一种权利要求1所述洋白蜡花粉变应原蛋白Fra p 1的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1、采集洋白蜡花粉，常温干燥或真空干燥或流化床干燥；

S2、对干燥后的花粉脱脂、干燥；

S3、将脱脂干燥后的洋白蜡花粉按重量g 体积ml 比1:50~1:10 加入pH 为7.9~8.2 磷酸盐—盐水缓冲液，2-8℃搅拌22~26 h 进行浸提；

所述磷酸盐—盐水缓冲液包括4 .5～5 .5g/L的氯化钠、0 .03％～0 .05％的磷酸二氢钾、1 .5％～2％十二水合磷酸氢二钠和0 .2％～0 .4％的苯酚；

S4、取步骤S3 后的浸提液，离心取上清液；将上清液过滤及除菌过滤；

S5、将过滤后的上清液进行超滤浓缩，获得超滤浓缩液；

S6、将所述超滤浓缩液经过二次过滤和除菌过滤后，真空冻干获得洋白蜡花粉变应原冻干品；

S7、将所述洋白蜡花粉变应原冻干品用pH 6.5~7.5 磷酸盐—盐水缓冲液复溶配置为洋白蜡花粉变应原原液，2~8℃放置，与等体积灭菌的甘油混匀，调节溶液pH 值至6.0~8.0；

所述步骤S1 还包括对原料洋白蜡花粉进行镜检鉴别和/或DNA 鉴定的步骤，其中DNA鉴定方法为，以SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2 为引物，对鉴别洋白蜡原料进行PCR扩增，并检测扩增产物。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2 中，所述花粉脱脂采用花粉与丙酮以1：5~1:1 的重量g 体积ml 比进行脱脂处理，重复脱脂至上层液体澄清。

4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤S4 中，所述离心的条件为8000~12000g，离心温度2~8℃，时间为15~20min；所述过滤及除菌过滤为先用4000 目滤布过滤后，再通过纸板过滤、0.45μm 和0.22μm滤膜依次过滤。

5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述超滤浓缩用3KD超滤膜超滤，当超滤透过液总蛋白含量≤0.02 mg/ml，停止超滤；当超滤透过液总蛋白含量0.02 mg/ml，更换超滤膜之后对超滤透过液重复超滤，直至超滤透过液总蛋白含量≤0.02 mg/ml 为止；

在步骤S6 中，所述真空冻干的条件为-50~-35℃冻结，2~8mbar 真空压力下，-25℃干燥，控制水分含量≤3%。

6. 根据权利要求1所述洋白蜡花粉变应原蛋白Fra p 1的应用，用于制备诊断变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗的制剂，所述诊断变态反应疾病包括过敏性哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎和慢性荨麻疹。

7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述洋白蜡花粉变应原蛋白Fra p 1用于制备注射液、舌下滴剂、变应原斑贴剂、变应原浸液稀释液。