[发明专利]一种猪胰脂肪酶固定化的方法

说明书

本发明涉及生物医用高分子材料制备的技术领域，具体是一种猪胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。本发明方法采用氨基化二氧化硅颗粒为载体，猪胰脂肪酶（IPPL）为固定化对象，猪胰脂肪酶与载体之间是依靠共价结合的方式相互连接的。本发明方法制备的固定化酶的活性可达6.67 U/g，固定化酶催化活性高，且制备方法简单高效环保，是一种具有广泛应用前景的绿色催化剂的制备方法。

技术领域

本发明涉及生物医用高分子材料制备的技术领域，具体是一种猪胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。

技术背景

酶催化合成生物可降解脂肪族聚酯是一种新型聚合方法，可以在温和条件下高效合成，有着传统方法难以比拟的优势，但该方法所合成的产物仍存在生物相容性低、机械性能差、分子量低等不足。但是通过酶的固定化、功能化改性、调节支链等方法可以提高酶的催化效率和活性、降低反应能耗和材料中残留的有毒物质、提高原料转化率和产物分子量、增强产物亲水性及开发材料新用途。近年来固载化脂肪酶的技术得到很大的发展，固定化技术使酶稳定性大幅度提高，单位酶的生产力提高，以及重复利用性明显提高。超临界二氧化碳（ScCO₂）作为反应介质已经被广泛应用于高分子聚合反应工程，且ScCO₂作为反应介质具有有机溶剂无法比拟的优势。固定化脂肪酶可在ScCO₂中用于生物医用高分子材料合成的绿色催化剂，催化活性高。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪胰脂肪酶（IPPL）固定化的方法。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种猪胰脂肪酶固定化的方法，所述方法采用氨基化二氧化硅颗粒为载体，猪胰脂肪酶（IPPL）为固定化对象，猪胰脂肪酶与载体之间是依靠共价结合的方式相互连接的。

上述一种猪胰脂肪酶固定化的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）将氨基化二氧化硅颗粒加入到0.1mol/L、pH=7~9的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中，超声，在氮气保护下，加入戊二醛，戊二醛在上述PBS溶液中的体积浓度为0.5~2.5%，搅拌，离心弃去上清液，用0.01 mol/L PBS溶液清洗颗粒，即得载体溶液；

（2）在载体溶液中，加入4 mg/mL的猪胰脂肪酶（IPPL）溶液，恒温反应；其中IPPL溶液与0.1mol/L PBS溶液的体积比为10:1~4；

（3）反应结束后，离心弃去上清液，加入甘氨酸封闭，离心洗涤，用0.01 mol/L PBS（含0.001 mol/L的EDTA和0.008 mol/L的半胱氨酸）清洗颗粒并恒温干燥，得氨基化二氧化硅固定化酶颗粒。

可选的，步骤（1）中PBS溶液的pH为7.5，戊二醛在上述PBS溶液中的体积浓度为2.0%；步骤（2）中IPPL溶液与0.1mol/L PBS溶液的体积比为10:2，反应温度40℃，反应时间8h。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明方法制备的固定化酶在超临界二氧化碳中活性可达到6.67 U/g，是一种优良的固定化酶催化剂。本发明酶与载体是共价键连接，结构稳定，使用的原料和溶剂均为绿色试剂，制备方法简单高效，可用于生物医用高分子材料的绿色催化剂，是一种具有广泛应用前景的固定化酶的制备方法。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。