[发明专利]一种用于检测慢病毒的核酸组和检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测慢病毒的核酸组和检测方法，涉及慢病毒检测技术领域，用于测试病毒含量与核酸残留及可复制慢病毒。该核酸组包括用于检测慢病毒VSV‑G基因的引物对，所述引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物。该核酸组可以用于检测样品中的慢病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及慢病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种用于检测慢病毒的核酸组和检测方法。

背景技术

慢病毒载体(Lentiviral vector)较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达用于基因治疗的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达特定基因，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性表达或沉默，为基因治疗、及在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。

慢病毒作为外源基因的携带者，慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。CART细胞需要慢病毒载体将CAR基因转入活化的T细胞。

常见的慢病毒检测方法有两种，分别为酶联免疫吸附实验(ELISA)和qPCR检测。其中酶联免疫吸附实验在慢病毒检测中发挥了重要的作用，但是此方法也存在一定的缺陷。酶联免疫吸附实验试剂盒价格较高，并且检测范围窄，灵敏度相对较差。qPCR检测价格低，检测范围宽，灵敏度高；但是没有明确的检测方法和对应的检测引物和探针。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测慢病毒的核酸组，该核酸组可以用于检测慢病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

本发明的另一目的在于提供一种快速检测慢病毒残留及可复制慢病毒的方法，该方法可以有效检测样品中的慢病毒残留及可复制慢病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

本发明是这样实现的：

聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction)(又称：多聚酶链式反应)PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。

一方面，本发明提供了一种用于检测慢病毒的核酸组，其包括用于检测慢病毒VSV-G基因的引物对，所述引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述核酸组还包括碱基序列如SEQ IDNO.3所示的荧光探针。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述荧光探针一端标记有荧光基团，另一端标记有淬灭基团。