[发明专利]一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法

说明书

本发明提供一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该技术方案首先探究了肺炎克雷伯氏菌的特异性分子标记，获得了一种对肺炎克雷伯氏菌具有专一指向性的蛋白质片段，以其作为标志物可用于肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌、鼻硬结克雷伯氏菌的种间鉴别。相对于现有技术的培养法和涂片法而言，本发明准确性更高，且可通过标志物蛋白含量近似性的推算肺炎克雷伯氏菌含量，从而在一定程度上实现定量检测。在以上技术方案的基础上，本发明开发了专用的取样装置，基于琼脂糖凝胶的附着作用和滤膜的拦截作用，在气流通过的过程中实现微生物的固着，再通过洗脱的方式将微生物分散至无菌水中，从而作为生物检材用于质谱分析。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体涉及一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法。

背景技术

空气环境是微生物生存的重要场所，也是人类与微生物接触的主要环境，因此对空气中悬浮微生物检测，对于疾病防控、环境质量监测具有重要意义。空气中的微生物主要来自人类的生活和生产过程。它们附着于尘埃或液滴上，随载体悬浮于空气中。在湿度大、灰尘多、通气不良、日光不足的情况下，空气中的微生物不仅数量较多，而且存活时间也较长。微生物污染空气，可使空气成为传播呼吸道传染病的媒介。要检测空气中微生物的种类和数量，需要特殊装置的采样器采样，然后将采得的空气样品通过培养基的培养进行计数。影响微生物计数的因素很多，包括空气中微生物的捕获方法、捕获过程中对微生物的杀灭作用以及培养温度和培养基的选择等。当下还不能找到一种能培养所有微生物的培养基，特别是立克次体和病毒不能在无生命的培养基中生长，因此，一般都是以细菌和真菌作为空气微生物检测的目标。

克雷伯氏菌是一类革兰氏阴性杆菌，其中肺炎克雷伯氏菌(K.peneumoniae) 对人致病性较强，是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一，可引起肺炎、脑膜炎、呼吸道感染、泌尿系感染、腹膜炎、腹泻及败血症等，主要通过空气传播，因此对空气环境中肺炎克雷伯氏菌的检测具有重要意义。现有技术中，目前检测肺炎克雷伯氏菌的方法主要包括微生物培养法、生理生化检测法以及实时荧光 PCR等分子诊断方法。其中微生物培养法耗时长且培养条件复杂，生理生化检测结果的判读依赖于操作者的主观判断，从而导致结果重复性差，易错判；实时荧光PCR技术需要昂贵的仪器设备、技术要求高。此外，上述方法的检测精度普遍只能到克雷伯氏菌属，对于属内的肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌 (K.ozaenae)、鼻硬结克雷伯氏菌(K.rhinoscleromatis)等菌种难以实现有效鉴别。另外，无论采用上述何种方法，快速、可重复的获取待测样品也是实现高效检测的重要技术前提，现有技术中，一般采用沉降平板法或液体撞击法实现取样，其完成速度较慢，也难以保证悬浮微生物的充分富集。综上所述，有必要从取样方式和检测原理层面加以改进，以实现对空气中肺炎克雷伯菌的高效检测。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的缺陷，提供一种用于空气中悬浮微生物快速检测的方法，以解决现有技术中常规检测方法对空气中肺炎克雷伯氏菌检测精度较低的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是在利用常规方法检测空气中的悬浮微生物时取样速度较慢、可重复性较差。

本发明要解决的再一技术问题是常规检测方法难以快速鉴别肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌、鼻硬结克雷伯氏菌等具体菌种。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该方法应用到取样装置，所述取样装置包括壳体，通道，风机，滤膜，筛网，其中壳体围成一通道，所述通道具有两个端口，在所述两个端口处分别连接有风机和滤膜，在所述通道中固定连接有若干筛网；

所述检测方法包括以下步骤：

1)将所述取样装置的壳体、风机、滤膜、若干筛网分别灭菌；将琼脂糖凝胶灭菌后降温至70℃，在无菌环境下将若干筛网浸泡于灭菌后的琼脂糖凝胶中，取出筛网在无菌环境下降至室温；