[发明专利]一步洗涤磁珠法血液DNA提取试剂盒

权利要求书

1.一种血液DNA提取试剂盒，包括裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液以及洗脱缓冲液；其特征在于，裂解液包括Tris 60mM、EDTA 15mM、NaCl 0.6M、SDS 0.3%、CHAPS 0.2%、NLS7%、GuHCl 72%、月桂酸钠 3%、NH₄Cl 0.2%、巯基乙醇1.0%，pH为7.1；结合液包括异丙醇70%、PEG 8000 8%、Brij 58 3%，pH为7.0；蛋白酶K溶液：蛋白酶K 20mg/ml；洗涤液包括GuHCl 7M、Tris 15mM、乙醇50%、碳酸氢钠 40mM，pH为9.0；洗脱缓冲液包括Tris 20mM、EDTA0.2mM，pH为8.5。

2.使用根据权利要求1所述的血液DNA提取试剂盒提取血液DNA的方法。

3.根据权利要求2的方法，具体包括：

1）取血液于离心管中，加入裂解液与结合液的混合液,再加入蛋白酶K溶液，最后加入磁珠；

2）将离心管加热震荡，置于磁力分离架上，移走全部上清液；

3）将离心管从磁力分离架中取出，加入洗涤液，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，移走全部上清液；

4）加入洗脱缓冲液，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，用将上清液移至另一离心管中；

5）回收得到的DNA。

4.根据权利要求3的方法，具体包括：

1）取200ul的新鲜血液于1.5ml离心管内，然后加入总计400ul的裂解液与结合液1:1的混合液,再加入20ul蛋白酶K溶液，最后加入10ul磁珠；

2）将离心管在60℃条件下震荡10分钟，将离心管置于磁力分离架上1分钟，使得管内的磁珠完全被吸附，用枪头在不接触到磁珠的前提下尽可能地移走全部上清液；

3）将离心管从磁力分离架中取出，加入1000ul 洗涤液，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，使得管内磁珠完全被吸附，小心地使用移液枪在不触动沉淀的情况下移走全部上清液；

4）加入100ul洗脱缓冲液，在60℃温度下震荡5分钟，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，用枪头将上清液移至另一干净离心管中；

5）回收得到的DNA，保存于-20℃。

5.根据权利要求1所述的血液DNA提取试剂盒在制备PCR检测试剂盒中的用途。

6.根据权利要求5的用途，其中所述PCR检测试剂盒还包括PCR反应所用的试剂。

7.根据权利要求1的血液DNA提取试剂盒在法医鉴定中的应用。