[发明专利]一种从葡萄籽中分离提取有效成分的制备方法

权利要求书

1.一种葡萄籽提取物，其特征在于包括平均聚合度为1.8-3的原花青素A、平均聚合度为3.5-5的原花青素B、平均聚合度为5-9的原花青素C，所述的原花青素A、B、C的重量百分比为85-95%、1-15%、1-10%；

原花青素A的制备方法为：（1）在室温下将葡萄籽置于5-10%的乙醇溶液中，静置时间为30min-2h；

（2）沥干葡萄籽表面溶液，干燥30-90s，将葡萄籽置于-25℃至-35℃的环境下预冷冻处理4-10h，冷冻处理完后，粗粉碎至10-30目；

（3）提取：将粗粉碎的葡萄籽进一步粉碎至85-110目，在10-20℃的条件下进行回流提取，提取溶剂为乙醇溶液，提取溶剂的用量为葡萄籽的10-15倍，乙醇溶液的浓度为40-60%，回流提取2-4次；

（4）将提取液经过大孔树脂吸附处理，利用水洗除去杂质部分，除去蛋白质和多糖类的杂质；

（5）洗脱，选择梯度的洗脱方式，首先以15-20%的乙醇溶液进行洗脱，然后以5-10%的乙醇溶液洗脱，最后再以25-35%的乙醇溶液洗脱；洗脱液的用量为8-15倍柱体积，洗脱时的流速为1-5倍柱体积/小时，梯度洗脱的温度为15-35℃；

（6）合并洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩浸膏，加水溶解并通过喷雾干燥的方式得到原花青素A；

原花青素B的制备方法为：（1）将葡萄籽干燥30-90s，置于-25℃至-35℃的环境下预冷冻处理2-4h，冷冻处理完后，粗粉碎至10-30目；

（2）提取：将粗粉碎的葡萄籽在室温条件下进行回流提取，提取溶剂为乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶剂，提取溶剂的用量为葡萄籽的10-15倍，乙醇溶液的浓度为15-40%，乙醇溶液和乙酸乙酯的体积比为1-5:1，回流提取2-4次；

（3）将提取液经过大孔树脂吸附处理，利用水洗除去杂质部分，除去蛋白质和多糖类的杂质；

（4）洗脱，选择梯度的洗脱方式，首先以25-35%的乙醇溶液进行洗脱，然后以5-10%的乙醇溶液洗脱；

洗脱液的用量为8-15倍柱体积，洗脱时的流速为1-5倍柱体积/小时，梯度洗脱的温度为15-35℃；

（5）合并洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩浸膏，加水溶解并通过喷雾干燥的方式得到原花青素B；

原花青素C的制备方法为：葡萄籽粉碎至10-30目，加入5-8倍30-50%的乙醇溶液，在35-45℃下提取2-4次，每次提取时间为1-3h，得到滤液，在-0.08MPa、40-50℃下减压浓缩得到浓缩液，添加1-3倍的水，水沉10-25h，得到上清液，对上清液在-0.08MPa、40-50℃下进行减压浓缩，浓缩液密度为1.12-1.15，在进风温度为170-190℃，出风温度为55-70℃下进行喷雾干燥得到原花青素C。

2.权利要求1所述的葡萄籽提取物在制备具有改善疲劳的组合物中的用途。

3.一种权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于通过选择平均聚合度为1.8-3的原花青素A制备得到，且通过添加平均聚合度为3.5-5的原花青素B、平均聚合度为5-9的原花青素C进一步增强改善疲劳和/或视疲劳的效果，所述的原花青素A、原花青素B和原花青素C的重量百分比为90-95%、1-8%、1-3%。