[发明专利]一种表达高活性冰核蛋白的基因工程菌及其构建方法有效
| 申请号： | 201910213647.5 | 申请日： | 2019-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN110004161B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 于非非;朱坤;吴金贤;曲炳良;余祥勇;刘永 | 申请（专利权）人： | 广东海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立 |
| 地址： | 524088 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 活性 核蛋白 基因工程 及其 构建 方法 | ||
1.一种表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法，其特征在于，以大肠杆菌为出发菌株，将大肠杆菌的β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因和脂肪酸降解抑制因子基因同时敲除，并转入硫酯酶基因表达载体和冰核蛋白基因表达载体，得到所述表达高活性冰核蛋白的基因工程菌；
所述大肠杆菌为E.coli MG1655；
所述β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述脂肪酸降解抑制因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述硫酯酶基因为拟南芥硫酯酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述冰核蛋白基因为来自菠萝泛菌的冰核蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求1所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法，其特征在于，通过P1噬菌体转导或Red重组技术敲除β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因和脂肪酸降解抑制因子基因。
4.根据权利要求1所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述硫酯酶表达载体的构建方法为将硫酯酶基因与质粒pBAD43连接。
5.根据权利要求2所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述冰核蛋白基因表达载体的构建方法为将冰核蛋白基因与载体pQE30连接。
6.一种表达高活性冰核蛋白的基因工程菌，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的方法构建得到。
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