[发明专利]一种单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法在审
| 申请号： | 201910216011.6 | 申请日： | 2019-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN109735583A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 薛亚平;程峰;周仕芃;郑裕国;金利群;徐建妙 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转氨酶 草铵膦 氨基供体 级联 催化 不对称合成 底物 谷氨酸 氨基酸序列 生物催化剂 发酵工序 技术难题 甲基羟基 体外表达 天冬氨酸 细胞催化 转氨反应 磷酰基 丁酸 离体 羰基 生产 | ||
1.一种单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，包括：以4-(甲基羟基磷酰基)-2-羰基-丁酸或其盐为底物，在氨基供体存在的反应体系中，利用离体的转氨酶或体外表达转氨酶的细胞催化底物，发生转氨反应，得到L-草铵膦；
其特征在于，所述氨基供体由两种氨基酸组成，分别为L-谷氨酸和L-天冬氨酸；反应体系中仅添加一种转氨酶，且该转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如权利要求1所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述细胞为表达转氨酶的工程菌，所述工程菌的宿主细胞为E.coli BL21(DE3)。
3.如权利要求2所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，反应体系中，以湿菌体重量计，所述工程菌的添加量为20～200g/L反应液。
4.如权利要求1所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述反应体系中的缓冲液为Tris/HCl缓冲液，pH为8～9。
5.如权利要求1所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述L-谷氨酸和L-天冬氨酸的摩尔比为1:4～1:8。
6.如权利要求5所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述氨基供体与底物的摩尔比为1.2～1.6:1。
7.如权利要求1所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述转氨反应的温度为35～45℃，时间为24～48h。
8.如权利要求1所述的单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，其特征在于，反应体系中还包括辅酶，所述辅酶为磷酸吡哆醛，所述辅酶与底物的摩尔比为1:10～1:200。
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