[发明专利]检测油菜BnALS1R基因的SNP标记引物及其应用

权利要求书

1.BnALS1R基因的SNP标记引物，其特征在于，所述SNP标记引物包括两条特异性引物和一条通用引物，所述两条特异性引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述通用引物如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的SNP标记引物，其特征在于，所述两条特异性引物5' 端分别连接不同的荧光接头序列。

3.权利要求1或2所述SNP标记引物在检测油菜BnALS1R基因发生SNP突变方面的应用。

4.一种油菜BnALS1R基因发生SNP突变的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒含有权利要求1或2所述的SNP标记引物。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括KASP反应混合液。

6.一种用于检测油菜BnALS1R基因第+1913位碱基发生等位基因分型的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

1）提取油菜样品基因组DNA；

2）以油菜基因组DNA为模板，利用权利要求1或2所述的SNP标记引物进行KASP反应检测；

3）如果只检测到第+1913位碱基对应的碱基G，则判定检测的油菜样品中不含抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R的纯合体；如果只检测到第+1913位碱基对应的碱基A，则判定检测的油菜样品中含抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R的纯合体；若检测位点第+1913位碱基同时检测到G和A，则判断检测的油菜样品中含抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R的杂合体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述KASP反应检测包括PCR扩增和荧光检测，所述PCR扩增条件为: 94℃15min；94℃ 20sec，61-55℃1min，每个循环退火温度降低0.6℃，共10个循环；94℃ 20sec，55℃ 1min，共26个循环。

8.获得具有咪唑啉酮类除草剂抗性的分子标记辅助选择方法，其特征在于，所述方法包括：采用权利要求1或2所述的SNP标记引物进行基因型检测，将含有抗性基因杂合型单株与轮回亲本回交，这样通过多次回交，在最后一代的自交群体中通过基因型检测，选择含抗性基因纯合型单株就可以培育出抗咪唑啉酮类除草剂油菜。

9.鉴定并增加杂交油菜种子纯度的方法，其特征在于，所述方法为采用权利要求6所述步骤1）~3）得到的分型结果统计杂交油菜种子的纯度，若杂合型的油菜杂交种种子数量占比未达到85%，需要通过田间喷施除草剂去杂；若杂合型的油菜杂交种种子数量占比达到85%及以上，不需要通过田间喷施除草剂去杂。

10.根据权利要求9所述的鉴定并增加杂交油菜种子纯度的方法，其特征在于，所述鉴定并增加杂交油菜种子纯度的方法是通过对网罩隔离授粉或自然授粉条件的F1杂种纯度进行鉴定，然后通过在苗期喷施除草剂去杂增加种子纯度。