[发明专利]一种重组型荞麦胰蛋白酶抑制剂突变体以及胰蛋白酶亲和材料

权利要求书

1.一种重组型荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI的突变体，命名为e-BTI，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如下SEQ.1所示：

LRQCSGKQEW PELVGERGSK AAKIIENENE DVRAIVLPEG TAVTRDLRCD 50

RVWVFVDERG VVVDTPVVM 69。

2.编码权利要求1所述突变体的核酸分子。

3.一种包含权利要求2所述核酸分子的载体或工程菌。

4.权利要求1所述突变体e-BTI的制备方法，包括以下步骤：

(1)、通过权利要求3所述载体构建BTI工程菌；

(2)、培养上述工程菌；

(3)、诱导胰蛋白酶抑制剂突变体e-BTI的表达；

(4)、突变体e-BTI的纯化：收集菌体、破碎菌体、将上层清液纯化，冷冻干燥后得到所述突变体e-BTI。

5.一种胰蛋白酶亲和材料，包括权利要求1所述突变体e-BTI和填料。

6.权利要求5所述亲和材料的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将e-BTI样品溶解于缓冲液中得e-BTI溶液；

(2)、吸取CNBr活化琼脂糖凝胶FF；

(3)、用上述缓冲液浸泡、洗涤、在摇床上振荡，e-BTI和填料进行偶联；

(4)、加入Tris-HCl用于封闭剩余的基团，得到偶联了e-BTI的填料即为所述胰蛋白酶亲和材料。

7.权利要求5所述胰蛋白酶亲和材料在分离提纯胰蛋白酶的用途，其特征在于，分离提纯胰蛋白酶包括以下步骤：

(1)、将权利要求5所述胰蛋白酶亲和材料装于层析柱中，洗涤后连接于蛋白纯化系统，用缓冲液1平衡层析柱；

(2)、将含有胰蛋白酶的混合物上样于装有胰蛋白酶亲和材料的层析柱，收集未结合蛋白穿透峰组分；

(3)、充分洗脱未结合蛋白后，更换缓冲液2为洗脱液，洗脱收集洗脱峰组分即为胰蛋白酶；

所述缓冲液1能够使胰蛋白酶与亲和材料特异性结合，其pH 为7.0-7.4；所述缓冲液2能够使胰蛋白酶从亲和材料解离下来，其pH为3.3-3.6。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在，所述缓冲液1的pH 为7.1-7.3，所述缓冲液2的pH为3.4-3.5。