[发明专利]同时检测中药材污染四类产毒真菌的多重PCR引物、方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910217269.8 | 申请日： | 2019-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN109762927A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 徐晖;鲁晓芳;罗朝权;詹若挺;陈蔚文;王文丽;郑润生 | 申请（专利权）人： | 广州中医药大学（广州中医药研究院） |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/67;C12R1/66;C12R1/77 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 张玲春 |
| 地址： | 510006 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 真菌 产生菌 中药材 多重PCR引物 试剂盒 污染 黄曲霉毒素 杂色曲霉毒素 多重PCR检测 检测灵敏度 引物特异性 赭曲霉毒素 第二引物 第三引物 第四引物 第一引物 分离纯化 直接检测 多重PCR 反应管 检出限 检测 | ||
1.同时检测中药材污染四类产毒真菌的多重PCR引物，上述四类产毒真菌为黄曲霉毒素产生菌、杂色曲霉毒素产生菌、伏马菌素产生菌和赭曲霉毒素产生菌，其特征在于：包括能在同一反应管中进行PCR反应的第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对和第五引物对，其中，
第一引物对用以扩增真菌rDNA基因Wen，包括正向引物Wen2F和反向引物Wen2R，分别包括SEQ ID NO.01和SEQ ID NO.02所示的序列；正向引物Wen2F为5’-TTCCATGCGAGCCCAACCTCCC-3’，反向引物Wen2R为5’-AGGGGACGACGACCCAAACA-3’；
第二引物对用以扩增黄曲霉毒素合成基因AF，包括正向引物AF-1F和反向引物AF-1R，分别包括SEQ ID NO.03和SEQ ID NO.04所示的序列；正向引物AF-1F为5’-GTGGACGGACCTAGTCCGACATCAC-3’，反向引物AF-1R为5’-GTCGGCGCCACGCACTGGGTTGGGG-3’；
第三引物对用以扩增黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素共同的合成基因AFST，包括正向引物AFST-1F和反向引物AFST-1R，分别包括SEQ ID NO.05和SEQ ID NO.06所示的序列；正向引物AFST-1F为5’-GGCCCTTGTGGTGGGGTTCAAATCGGTGA-3’，反向引物AFST-1R为5’-CTTAGGTGACGACTTGGCGGGCTTTGATC-3’；
第四引物对用以扩增赭曲霉毒素合成基因OTA，包括正向引物OTA-1F和反向引物OTA-1R，分别包括SEQ ID NO.07和SEQ ID NO.08所示的序列；正向引物OTA-1F为5’-GCCAGACCATCGACACTGCATGCTC-3’，反向引物OTA-1R为5’-CGACTGGCGTTCCAGTACCATGAGCC-3’；
第五引物对用以扩增伏马菌素合成基因Fum，包括正向引物Fum-1F和反向引物FB-1R，分别包括SEQ ID NO.09和SEQ ID NO.10所示的序列；正向引物FB-F为5’-GAGCTTGTCCTTCTCACTGG-3’，反向引物FB-R为5’-GAGCCGACATCATAATCAGT-3’。
2.权利要求1所述的多重PCR引物在制备同时检测中药材污染四类产毒真菌的试剂或器械中的应用；所述四类产毒真菌分别为黄曲霉毒素产生菌、杂色曲霉毒素产生菌、伏马菌素产生菌和赭曲霉毒素产生菌。
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