[发明专利]量化靶基因的突变型等位基因负担的方法

权利要求书

1.一种量化在体内的非-融合的靶基因的突变型等位基因负担的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含有下列核酸试剂：

反应混合物，其含有(i)用于检测位于该靶基因的第一外显子的突变型等位基因序列的突变型等位基因-特异性引物对与第一可检测的探针，以及(ii)用于检测位于该靶基因的第二外显子的内部对照序列的内部对照序列-特异性引物对与第二可检测的探针，该第二外显子不同于该第一外显子，该反应混合物用来对得自于该个体的基因组DNA进行第一定量聚合酶链式反应，以测量该靶基因的突变型等位基因表达水平，以及

多个标准稀释液，其通过对第一质粒进行使用第二质粒的连续稀释所形成，所述标准稀释液用来进行使用该反应混合物的第二定量聚合酶链式反应，以建立该靶基因的突变型等位基因负担的标准曲线，该标准曲线用来与所测得的靶基因的突变型等位基因表达水平进行比对，以推定在该个体内的靶基因的突变型等位基因负担，

其中，该第一质粒包括该位于第一外显子的突变型等位基因序列以及该位于第二外显子的内部对照序列，该第二质粒包括位于该第一外显子的野生型等位基因序列以及该位于第二外显子的内部对照序列。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：该突变型等位基因序列具有实质上相同于该野生型等位基因序列的核苷酸长度，以及该第一质粒具有实质上相同于该第二质粒的核苷酸长度。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：用于该第一与第二定量聚合酶链式反应各者中的反应混合物进一步包括阻断剂，其杂交至该靶基因的野生型等位基因序列并且抑制该突变型等位基因-特异性引物对中的至少一个引物结合至该靶基因的野生型等位基因序列。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：该阻断剂是在3’-端具有非-可延伸的部分的寡核苷酸，该非-可延伸的部分选自由下列所构成的群组：肽核酸、锁核酸、拉链核酸、桥核酸、苏糖核酸、三唑核酸、氨基-C7、非-可延伸的核苷酸、小沟结合子，以及它们的组合。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：该阻断剂是在其3’-端具有二-去氧核苷酸三磷酸的寡核苷酸。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：该非-融合的靶基因是疾病-关联性基因。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：该疾病-关联性基因选自由下列所构成的群组：癌症-关联性基因、与遗传性疾病有关联的基因，以及它们的组合。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：该非-融合的靶基因选自由下列所构成的群组：JAK2、K-Ras、B-Raf、EGFR，以及它们的组合。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：该非-融合的靶基因是JAK2。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：该突变型等位基因序列是JAK2 V617F。