[发明专利]从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法

权利要求书

1.从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)、将挑选去杂后的黑枸杞干果真空冷冻干燥至恒重，得到干燥后黑枸杞干果；

2)、将步骤1)所得的干燥后黑枸杞干果除去果梗和蒂，用粉碎机粉碎，得到黑枸杞果实粉末；

3)、按照1g/40±10ml的料液比，将步骤2)所得的黑枸杞果实粉末与酸化甲醇溶液混合后于摇床中振荡暗提取12±2小时，然后离心，分别得到黑枸杞果实残渣Ⅰ和提取液Ⅰ；

酸化甲醇溶液为酸与甲醇的混合溶液；酸的体积浓度为2％；

4)、将提取液Ⅰ过滤从而除去杂质，得到黑枸杞花色苷提取液；

5)、将黑枸杞花色苷提取液于40±10℃旋转蒸发至干，得到紫黑色粘稠的黑枸杞花色苷浸膏，再加入酸水溶液复溶，得到黑枸杞花色苷浓缩液；

酸水溶液为酸与水的混合溶液；酸的体积浓度为2％；

6)、将黑枸杞花色苷浓缩液用大孔树脂吸附后，先用蒸馏水洗脱，再用酸化甲醇溶液洗脱，当洗脱液出现颜色时开始收集，直至洗脱液变为无色时停止收集，得到纯化的黑枸杞果实花色苷提取液；

洗脱用的蒸馏水用量为大孔树脂装柱体积的4～6倍；洗脱用的酸化甲醇溶液的用量为大孔树脂装柱体积的3～5倍；

大孔树脂是AB-8大孔树脂；

7)、将所述步骤6)得到的纯化的黑枸杞果实花色苷提取液于40±10℃旋转蒸发至干，得到纯化后的黑枸杞花色苷浸膏，然后加入酸化甲醇溶液复溶；得到浸膏溶液；

8)、将所述步骤7)得到的浸膏溶液采用高效液相色谱法进行洗脱分离，从而获得相应的花色苷

使用反相C-18柱，流速为0.8ml/min、进样量为20μl，检测波长为525nm；

流动相由A相和B相组成；

A相为在体积浓度为10％的甲酸水溶液中加入三氟乙酸所得，所述三氟乙酸在A相中的体积浓度为0.1％；

B相为甲醇与乙腈的混合液，甲醇在B相中的体积浓度为15％；

梯度洗脱程序为：

0–10min，3–11.5％B相，线性梯度；

10-20min，11.5％B相，等度洗脱；

20-30min，11.5–13.5％B相，线性梯度；

30-35min，13.5-15.5％B相，线性梯度；

35-40min，15.5-16％B相，线性梯度；

40-45min，16-23％B相，线性梯度；

45-55min，23-3％B相，线性梯度；

55-60min，3-3％B相，等度洗脱。

2.根据权利要求1所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于还包括如下的果实残渣提取：

将步骤3)所得的黑枸杞果实残渣Ⅰ与酸化甲醇溶液混合后于摇床中振荡暗提取6±1小时，然后离心，分别得到黑枸杞果实残渣Ⅱ和提取液；所用的酸化甲醇溶液同步骤3)中的酸化甲醇溶液的体积用量；

以黑枸杞果实残渣Ⅱ替代黑枸杞果实残渣Ⅰ重复上述暗提取和离心1～2次；

所有的提取液与步骤3)所得的提取液Ⅰ合并后作为总提取液进行后续的步骤4)。

3.根据权利要求1或2所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于：

酸化甲醇溶液、酸水溶液中的酸必须相同，为甲酸、柠檬酸、酒石酸或乙酸中的任一。

4.根据权利要求3所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于：

所述步骤4)的过滤为真空减压过滤，过0.45μm有机膜。

5.根据权利要求3所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于：

暗提取后的离心均为6000±600r/min条件下离心8±2分钟。

6.根据权利要求3所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于：

每1.5g步骤2)所得的黑枸杞果实粉末，步骤5)中配用的酸水溶液的用量为10±2ml；步骤7)中配用的酸化甲醇溶液的用量为10±2ml。

7.根据权利要求3所述的从黑枸杞干果中提取分离花色苷的方法，其特征在于：

所述步骤1)的真空冷冻干燥为冷肼温度为-50～-60℃，真空度为0.20mbar。