[发明专利]一种无损伤巴布亚企鹅性别鉴定方法有效
| 申请号： | 201910222691.2 | 申请日： | 2019-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN109897890B | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 刘卫东;田甲申;张胜久;鲍相渤;鹿志创;杜静;韩家波;李艳秋;刘明;刘有林;王京瑞 | 申请（专利权）人： | 辽宁省海洋水产科学研究院;大连圣亚旅游控股股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848;C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 周媛媛;李馨 |
| 地址： | 116023 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 损伤 巴布亚 企鹅 性别 鉴定 方法 | ||
1.一种无损伤巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)以被检巴布亚企鹅个体粪便为DNA来源，粪便在裂解液中裂解，所用裂解液组分体积百分比为6％-8％蛋白酶K，0.4％-0.6％吐温-20，10％的10×Taq Buffer，余量为纯水；
(2)以粪便裂解液作为模板1进行巢式PCR第一次扩增，再以第一次扩增得到扩增产物为模板2进行巢式PCR第二次扩增，得到特异性扩增产物；
(3)将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判定被检企鹅性别，若被检个体巢式PCR扩增产物为两条带则判断为雌性，一条带则判断性别为雄性；
步骤(2)中所述的巢式PCR第一次扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；
步骤(2)中所述的巢式PCR第二次扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示。
2.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的企鹅粪便为刚排出体外的新鲜粪便或保存于-20℃不超过3个月的新鲜粪便。
3.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的企鹅粪便的用量为2-20mg。
4.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的企鹅粪便裂解的裂解条件为55℃维持20-30分钟后85℃维持15分钟。
5.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的巢式PCR第一次扩增反应的反应体系为20μL，反应液组分中模板1体积为1μL，10×Taq Buffer体积为1.9μL。
6.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的巢式PCR第一次扩增反应程序为：94℃预变性60s；94℃变性25s，55-57℃退火25s，72℃延伸25s，28-34个循环。
7.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的巢式PCR第二次扩增反应的反应体系为20μL，反应液组分中模板2体积为1μL，10×Taq Buffer体积为1.9μL。
8.根据权利要求1所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的巢式PCR第二次扩增反应程序如下：94℃预变性60s；94℃变性25s，54-56℃退火25s，72℃延伸25s，36-40个循环；72℃终延伸60s。
9.根据权利要求5或7所述的巴布亚企鹅性别鉴定方法，其特征在于：所述10×TaqBuffer为10×La Taq Buffer或10×EX Taq Buffer。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于辽宁省海洋水产科学研究院;大连圣亚旅游控股股份有限公司，未经辽宁省海洋水产科学研究院;大连圣亚旅游控股股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910222691.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
