[发明专利]一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，所述的抗肿瘤活性蛋白CM-1具体制备方法如下：

（1）驼乳样品过滤除杂，脱脂，收集脱脂乳，调节pH至4.6，于30-80℃水浴加热10-45min或放置过夜后，离心去除沉淀，收集上清液，调节pH至初始值，分离乳清蛋白，其中超滤法经截留分子量10KDa-100KDa滤膜过滤，盐析法采用硫酸铵饱和度20%-70%进行分级沉淀，经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，得到分子量大小在10KDa-100KDa范围的抗肿瘤活性蛋白组分CM-1，冻干备用；

（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白组分CM-1蛋白质多态性将步骤（1）获得的冻干组分用12-15%分离胶与5%浓缩胶进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，考马斯亮蓝R-250染色，通过与已知分子量的蛋白质标准品比对，测定其分子量，保证每批样本蛋白质多态性一致。

2.如权利要求1所述的一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，分离乳清蛋白采用盐析的方法获得的抗肿瘤活性蛋白CM-1，硫酸铵饱和度在20%-70%范围的活性蛋白，其分子量范围为10KDa -100KDa。

3.如权利要求1所述的一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，抗肿瘤活性蛋白CM-1共计含有共鉴定出218种蛋白质，其中30种为未知蛋白质，明确的有188种，含有糖基化依赖性细胞粘附分子1（GlyCAM-1）、α-乳白蛋白（α-La）、乳清酸性蛋白（WAP）、肽聚糖识别蛋白1（PGRP-S）、维生素D结合蛋白、乳过氧化物酶、IgG-Fc片段结合蛋白样蛋白、14-3-3蛋白质、Ig γ-3C、乳凝集素（Mfge8）、Igλ-C亚型19样蛋白、乳铁蛋白（Lf）、肌动蛋白（Actin）、胺氧化酶（SSAO）、核连蛋白（Nucleobindin）、泛素- 60s核糖体蛋白L4（Ubiquitin-60S RPL4）、骨桥蛋白（OPN）、 RAS致癌基因家族成员（Rab-18、Rab-11B、Rab-1A），均与生命过程、细胞组成以及分子功能方面密切相关。

4.如权利要求1所述的一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，抗肿瘤活性蛋白CM-1相对含量大于1%的蛋白质有7种，分别是糖基化依赖性细胞粘附分子1（GlyCAM-1）、α-乳白蛋白（α-La）、乳清酸性蛋白（WAP）、肽聚糖识别蛋白1（PGRP-S）、Igγ-3C、乳凝集素（Mfge8）、Igλ链C亚型19样蛋白。

5.如权利要求1所述的一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1，其特征在于，CM-1中含有如乳铁蛋白（Lf）、肌动蛋白（Actin）、胺氧化酶（SSAO）、核连蛋白（Nucleobindin）、泛素-60s核糖体蛋白L4（Ubiquitin-60S RP L4）、骨桥蛋白（OPN）、 RAS致癌基因家族成员（Rab-18、Rab-11B、Rab-1A等）、糖基化依赖性细胞粘附分子1（GlyCAM-1）、维生素D结合蛋白、乳过氧化物酶、IgG-Fc片段结合蛋白样蛋白、14-3-3蛋白质多种与肿瘤发生、发展密切相关的蛋白质。

6.如权利要求1所述驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。

7.如权利要求6所述驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1在抑制肿瘤细胞增殖中的应用，其特征在于，CM-1对人肝癌细胞HepG2细胞和人肝癌细胞BEL-7404细胞的增殖抑制作用呈现剂量和时间依赖性。

8.如权利要求1所述驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1在与抗癌药物联合给药抑制肿瘤中的应用。

9.如权利要求8所述驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1在与抗癌药物联合给药抑制肿瘤中的应用，其特征在于，CM-1与抗癌药物联合给药在抑制人食管癌肿瘤中的应用。

10.如权利要求8所述驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1在与抗癌药物联合给药抑制肿瘤中的应用，其特征在于，抗癌药物为5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）、紫杉醇（Taxol）、甲氨蝶呤（MTX）、复方替加氟（UFT）、阿糖胞苷（CAR）、丝裂霉素（MMC）、博来霉素（BLM）。