[发明专利]一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用，通过分离乳清蛋白采用超滤的方法获得，以新疆双峰驼乳清蛋白为研究对象，通过组分CM‑1，含有188种已知蛋白质，含有糖基化依赖性细胞粘附分子1、α‑乳白蛋白、肽聚糖识别蛋白1、维生素D结合蛋白、乳过氧化物酶、IgG‑Fc片段结合蛋白、14‑3‑3蛋白质、Igγ‑3C、乳铁蛋白、肌动蛋白、胺氧化酶、核连蛋白、泛素‑60s核糖体蛋白L4、RAS致癌基因家族成员等多种与肿瘤发生发展密切相关的蛋白质。实验表明，CM‑1对肿瘤细胞有明显抑制增殖作用，与化疗药物联合给药，抑制肿瘤细胞增殖的效果明显优于化疗药物单独给药，为肿瘤治疗提供一种多药联合方案，具有广泛的开发价值。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地说，本发明涉及一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用技术领域。

背景技术

骆驼是干旱、半干旱地区的主要畜种。分为单峰骆驼和双峰骆驼两种，单峰驼主要集中在东非、北非、印度次大陆地区和整个阿拉伯半岛，双峰驼主要分布在中国的北部和西北部地区以及整个蒙古国的沙漠或半沙漠地区，可产绒毛、泌乳、役用、肉用。

骆驼乳因其独特的物理性质及化学性质在人类营养和疾病治疗中发挥着重要的作用。骆驼乳中总蛋白含量为2.15％-4.90％，其中乳清蛋白占总蛋白的20％-25％。骆驼乳蛋白质属营养学上的优质蛋白质，其中含有α-乳清蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、血清白蛋白等保护性蛋白和多种生物活性因子，具有很高的营养价值。

目前，骆驼乳的功效研究多集中在辅助降血糖、调节机体免疫功能、抗菌、抗炎、抑制肿瘤细胞增殖、辅助治疗艾滋病、冠心病等方面。国内研究以双峰驼乳为主，国外尤其是沙特阿拉伯、阿联酋、伊朗、埃及等东亚和北非等地区，对单峰驼研究较多。

发明内容

本发明提供一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用，通过本发明从双峰驼乳中获得的抗肿瘤活性蛋白含有糖基化依赖性细胞粘附分子1、α-乳白蛋白、乳清酸性蛋白、肽聚糖识别蛋白1、维生素D结合蛋白、乳过氧化物酶、IgG-Fc片段结合蛋白、14-3-3蛋白质、Igγ-3C区域、乳凝集素、Igλ-C亚型19样蛋白、乳铁蛋白、肌动蛋白、胺氧化酶、核连蛋白、泛素-60s核糖体蛋白L4、骨桥蛋白、RAS致癌基因家族成员Rab-18、Rab-11B、Rab-1A等蛋白质，具有明显的抗多种因素所致食管癌的作用，通过体外细胞模型研究，证明抗肿瘤活性蛋白对人肝癌细胞有抑制作用；并且抗肿瘤活性蛋白与化疗药物联用有显著的协同抗人食管癌肿瘤作用，增加肿瘤对化疗药物的敏感性，达到相同抑瘤效果的情况下可以通过减少化疗药物的用量减轻化疗的毒副作用。本发明驼乳乳清活性蛋白具有开发高效、低毒的新型抗肿瘤药物的前景，为临床上肿瘤的治疗提供了一种有效的手段以及药物组合方案。

本发明提供的一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1的制备方法，通过包括如下步骤的方法制得：

(1)驼乳样品过滤除杂，脱脂，收集脱脂乳，调节pH至4.6，于30-80℃水浴加热10-45min或放置过夜后，离心去除沉淀，收集上清液，调节pH至初始值，分离乳清蛋白，其中超滤法经截留分子量10KDa-100KDa滤膜过滤，盐析法采用硫酸铵饱和度20％-70％进行分级沉淀，经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，得到分子量大小在10-100KDa范围的抗肿瘤活性蛋白组分CM-1，冻干备用；

(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白组分CM-1蛋白质多态性，将步骤(1)获得的冻干组分用12-15％分离胶与5％浓缩胶进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，考马斯亮蓝R-250染色，通过与已知分子量的蛋白质标准品比对，测定其分子量，保证每批样本蛋白质多态性一致。

本发明提供的通过如上制备方法获得一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1。

本发明中，所述的驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白CM-1通过分离乳清蛋白采用超滤的方法获得，以新疆双峰驼乳清蛋白为研究对象，通过蛋白提取获得抗肿瘤活性蛋白CM-1。