[发明专利]一种实时荧光定量PCR仪校准用标准物质及其应用

权利要求书

1.一种用于实时荧光定量PCR仪校准用标准物质，其特征在于，该标准物质由国家标准物质编号为GBW(E)090640的EGFR-1(18-；19-，20-；21-)基因突变标准物质，按重量法配制成共9个不同的浓度梯度组成，其中浓度0copy/μL为空白对照，记为NTC；浓度1.16E+02copy/μL为标准物质1，记为S1；浓度1.21E+03copy/μL为标准物质2，记为S2；浓度1.18E+04copy/μL为标准物质3，记为S3；浓度1.15E+05copy/μL为标准物质4，记为S4；浓度1.13E+06copy/μL为标准物质5，记为S5；浓度1.13E+07copy/μL为标准物质6，记为S6；浓度1.08E+08copy/μL为标准物质7，记为S7；浓度2.50E+05copy/μL为标准物质8，记为U1；浓度5.00E+05copy/μL为标准物质9，记为U2。

2.如权利要求1所述的实时荧光定量PCR仪校准用标准物质的配制方法，其特征在于，确定浓度值的具体步骤如下：

将所述国家级标准物质用经过校准的精密度达0.000001g的精密天平进行标准物质的系列配制如下表，其中所述国家标准物质拷贝数浓度为1.28×10E+14copy/μL标为S0、称取S0和水分别为0.001002g，13.040012g得到的样本标为S10、

称取S10和水分别为1.003245g，9.023487g得到的样本标为S9、

称取S10和水分别为0.103451g，9.901345g得到的样本标为S8、

称取S10和水分别为0.010781g，9.984256g得到的样本标为S7、

称取S10和水分别为0.001123g，9.990123g得到的样本标为S6、

称取S6和水分别为1.004561g，9.015278g得到的样本标为S5、

称取S6和水分别为0.102319g，9.910233g得到的样本标为S4、

称取S6和水分别为0.010462g，9.983241g得到的样本标为S3、

称取S6和水分别为0.001067g，9.984567g得到的样本标为S2、

称取S5和水分别为0.001021g，9.930123g得到的样本标为S1；

以配制好的S5为起点，用经过校准的精密度0.01mg的天平配制未知样品1即U1和未知样品2即U2：

称取S5和水分别为350g，440g得到的样本标为U2、

称取U2和水分别为350g，350g得到的样本标为U1。

3.利用权利要求1所述的用于实时荧光定量PCR仪校准用标准物质制成的实时荧光定量PCR仪校准用板型。

4.如权利要求3所述的实时荧光定量PCR仪校准用板型，其特征在于，其是具有24孔排布、30孔排布、48孔排布、96孔排布、384孔排布的板型。

5.如权利要求3所述的实时荧光定量PCR仪校准用板型，其特征在于，

对于24孔排布，U1和U2标记分别为4个孔，S1至S7标记分别为2个孔，NTC标记为2个孔，行按从左至右，列按从从上到下的顺序依次排列U1、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、NTC、U2；对

于30孔排布，U1和U2标记分别为6个孔，S1至S7标记分别为2个孔，NTC标记为4个孔，行按从左至右，列按从上到下的顺序依次排列U1、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、NTC、U2；

对于48孔排布，U1和U2标记分别为6个孔，S1至S7标记分别为2个孔，NTC标记为4个孔，行按从左至右，列按从上到下的顺序依次排列U1、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、NTC、U2；

对于96孔排布，U1和U2标记分别为24个孔，S1至S7标记分别为6个孔，NTC标记为6个孔，行按从左至右，列按从上到下的顺序依次排列U1、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、NTC、U2；

对于384孔排布，U1和U2标记分别为96个孔，S1至S7标记分别为24个孔，NTC标记为24个孔，行按从左至右，列按从上到下的顺序依次排列U1、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、NTC、U2。