[发明专利]一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法

权利要求书

1.一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于包含如下操作步骤：

1）将胞外囊泡/外泌体与微球孵育结合；

2）将结合后的胞外囊泡/外泌体进行数字核酸扩增检测，定量。

2.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤1）中微球为功能性微米纳米尺寸的微球包括但不限于纳米磁珠、聚苯乙烯微球和琼脂糖微球，优选为纳米磁珠和聚苯乙烯微球。

3.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤1）中胞外囊泡/外泌体与微球结合方式为包括但不限于非特异性吸附和分子结合方式，所述非特异性结合包括但不限于微球胞外囊泡/外泌体相互吸附，所述分子结合包括但不限于抗体-抗原作用、DNA杂交结合、链霉亲和素-生物素结合。

4.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤1）中微球直径为100 nm-100 μm，优选直径为500 nm-10 μm。

5.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤1）中孵育条件为在10 ℃-80 ℃下孵育5 min-24 h，优选为10 ℃-80 ℃下孵育5 min-24h。

6.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤1）中微球的数量大于与胞外囊泡/外泌体的数量，优选为胞外囊泡/外泌体的数量为微球数量的1/2-1/100000，更优选比例为1/10-1/10000。

7.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤2）中核酸扩增包括但不限于PCR扩增、核酸等温扩增、LAMP扩增、核酸信号扩增。

8.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤2）中核酸扩增采用的核酸扩增混合液为含有DNA聚合酶、引物、核酸荧光探针的混合液，混合液中的每一种物质相对于胞外囊泡/外泌体的数目均为过量。

9.如权利要求1所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤2）中定量方法包括基于荧光信号强度进行相对定量方法和对荧光信号点计数进行绝对定量方法。

10.如权利要求9所述的一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，其特征在于所述步骤2）中所述的对荧光信号点计数进行绝对定量的方法是指：将标记后的胞外囊泡/外泌体与核酸扩增混合液混合后分散到大量的液滴或小室中，进行核酸扩增反应；基于泊松分布，每个液滴或小室至多有一个胞外囊泡/外泌体，统计有荧光信号的液滴或小室数目，即可得到胞外囊泡/外泌体的数目。