[发明专利]永生化干细胞、其制备方法、及以其生成物为有效成分的药物组合物和药物制剂

说明书

本发明提供了永生化干细胞、及其产生方法，所述永生化干细胞可产生具有由种种原因所致的各种组织的再生能力的生长因子。本发明的永生化干细胞是如下选择的：将选自由哺乳类的间叶细胞、初生胚和体细胞组成的组中的干细胞分离出来；对上述干细胞进行初期培养，得到原代培养细胞，向该原代培养细胞中导入4种基因，制作基因导入细胞；从上述基因导入细胞中以STRO‑1的表达为指标来选择该永生化干细胞。本发明还提供损伤组织复原用药物组合物和药物制剂，其含有该永生化干细胞的培养上清作为有效成分。

本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/JP2013/059376，国际申请日为2013年03月28日，中国国家申请号为201380027178.9，进入中国国家阶段的进入日为2014年11月24日，发明名称为“永生化干细胞以及以其生成物为有效成分的药物组合物和药物制剂”。

技术领域

本发明涉及牙髓来源的永生化干细胞以及以其生成物为有效成分的药物组合物和药物制剂。更详细地说，本发明涉及对于由自然脱落的或拔除的人乳牙或恒牙的牙髓得到的干细胞进行修饰所得到的永生化干细胞、以该细胞所产生的各种生物因子为有效成分的药物组合物以及药物制剂。

背景技术

对于使由于多种原因而受到损伤的生物体的功能复原的方法来说，大致可分为移植医疗和再生治疗。移植医疗是指接受由供体提供的脏器，通过移植该脏器而使生物体的功能复原。

与此相对，再生治疗是指下述治疗：对包括本人在内的几个人的细胞或组织进行培养，对其进行加工，从而来替换具有障碍的脏器，由此来对缺失的组织或脏器进行修复或使其再生，该再生治疗中会使用干细胞等。

目前，在再生治疗中所应用的或者能够应用的干细胞为人体性干细胞、人胚性干细胞(ES细胞)以及人工多能性干(iPS)细胞这3种。

此处，人体性干细胞已经在研究中进行使用，其存在于成人的组织中，具有仅分化成特定的组织、器官或脏器的特性。需要说明的是，在骨髓或脂肪组织中存在的“间叶干细胞”可特别地分化成骨、软骨、血管等多种组织。在使用这样的体性干细胞的情况下，若利用自体细胞，则不会发生免疫排斥，并且植入也较好。另外，并没有关于这些干细胞的长期培养会导致肿瘤化的报告。

另一方面，已知能够进行分化的细胞受到一定程度的限制；在由人体组织进行采集时会伴有侵袭；进行分化的组织的种类受到限制；并且培养可传代数被限制在四十几次、以天数计为100～200天。

人胚性干细胞(ES细胞)为将生殖医疗等中产生的剩余胚(胚胞)中的“内部细胞块”取出、并对其进行培养所得到的干细胞。由于其形成作为具有多分化潜能性的指标的畸胎瘤，因而认为其在三胚层的任意层均可分化。还有报告指出其可分化为心肌、神经、网膜。由于胚性干(ES)细胞为永生化的细胞株，因而一个细胞株能够无限地持续培养。并且，在适当的培养条件下，能够以细胞的形式大量制造均匀的制品。

另一方面，由于其利用受精卵，因而需要有严格的对策以使其在提供时不会产生伦理问题。并且，由于其基本上为异体移植，因而需要处理免疫应答所致的排斥反应。此外还已知，在细胞培养时，需要使用异种细胞或血清；在移植后的再生组织中混有即使少量的未分化细胞时，也容易形成畸胎瘤(良性肿瘤)。

人的人工多能性干(iPS)细胞为通过将在ES细胞中特异性表达的基因的一部分导入到成人细胞(皮肤等)中而确立的细胞。在使用自体来源的iPS细胞时，不会产生免疫排斥的问题，能够直接利用ES细胞的分化技术。

最后，人工多能性干(iPS)细胞不像ES细胞那样利用受精卵，而能够使用成人组织来制作与胚性干细胞大致同样性质的细胞，在利用自体来源的iPS细胞时，也不会出现由于免疫反应所带来的排斥反应的问题。

此外还已知，其不仅容易良性肿瘤化、而且还容易恶性肿瘤(胚细胞癌)化；并且由于从导入了基因的全部细胞中选择形态上与ES细胞类似的细胞，因而作为iPS细胞被确立的细胞的比例低。