[发明专利]一种鼠单克隆抗体功能轻链可变区基因的扩增方法在审
| 申请号： | 201910235222.4 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109929835A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 叶传涛;雷迎峰;贾战生;边培育;张静;董阳超;王媛;徐志凯 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 西安文盛专利代理有限公司 61100 | 代理人： | 彭冬英 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 轻链可变区基因 鼠单克隆抗体 反转录 扩增 反转录产物 轻链可变区 杂交瘤细胞 内源性 轻链可变区序列 恒定区引物 轻链CDR3区 特异性引物 前导 特异引物 恒定区 嵌合体 终产物 转录本 降解 轻链 制备 | ||
1.鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：包括以下步骤：
⑴杂交瘤细胞总RNA提取；
⑵第一轮反转录反应制备cDNA：
在第一轮反转录反应中，使用内源性非功能轻链CDR3区特异性引物进行反转录，反应结束后使用RNase H对反应产物中RNA-DNA嵌合体的RNA链进行降解，以去除RNA模板中内源性非功能轻链可变区转录本；
⑶第二轮反转录反应制备cDNA：
在第二轮反转录反应中，以第一轮产物为模板，以鼠单克隆抗体轻链恒定区特异性引物进行反转录，反应结束后使用RNase H降解RNA-DNA嵌合体的RNA链；
⑷鼠单克隆抗体轻链可变区扩增：
最后使用前导区及恒定区引物进行PCR扩增功能轻链可变区序列。
2.如权利要求1所述的鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：其中在上述第一轮反转录反应中引物设计模板内源性非功能轻链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.如权利要求1所述的鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：其中在上述第一轮反转录反应中使用的内源性非功能轻链CDR3区特异性引物核苷酸序列P1为acctattactgtcagcacatta。
4.如权利要求1所述的鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：其中在上述第二轮反转录反应中引物设计模板鼠单克隆抗体轻链恒定区核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
5.如权利要求1所述的鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：其中在上述第二轮反转录反应中使用的鼠单克隆抗体轻链恒定区特异性引物核苷酸序列P2为ggatacagttggtgcagcatc。
6.如权利要求1所述的鼠单克隆抗体轻链可变区扩增方法，其特征在于：其中在上述PCR扩增轻链可变区序列使用前导区引物序列P1为acctattactgtcagcacatta和P3为gayattgtgmtsacmcarwct。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军第四军医大学，未经中国人民解放军第四军医大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910235222.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
