[发明专利]一种血液样本中胰岛素类似物的检测方法

说明书

本发明涉及一种血液样本中胰岛素类似物的检测方法，包括如下步骤：(1)确定LC‑MS/MS条件；(2)绘制标准曲线，将胰岛素类似物溶于甲醇中，稀释制成胰岛素类似物标准溶液，再加入大鼠血浆样本中制成胰岛素类似物标准曲线样品，将标准曲线样品通过前处理后以LC‑MS/MS条件分别检测标准曲线样品，并根据检测结果绘制胰岛素类似物的标准曲线；(3)样品检测，将待测血液样本通过前处理后，以LC‑MS/MS条件进行检测，并将检测结果与标准曲线对照计算出待测血液样本中胰岛素类似物的含量。本发明的检测方法克服了现有技术中检测方法无法实现胰岛素类似物在体内较低浓度水平的精准定量检测的缺陷，为胰岛素类似物在动物体内的药代动力学中的检测提供了简便的分析方法。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，尤其涉及一种血液样本中胰岛素类似物的检测方法。

背景技术

胰岛素类似物(Insulin analog)，又称餐时胰岛素，泛指通过对胰岛素结构的修饰模拟正常胰岛素的分泌，并模拟胰岛素生理作用的物质。

胰岛素由胰岛β细胞受内源或外源性物质如葡萄糖的刺激分泌，属于可溶性酸性蛋白，主要结构包括两条肽链(A链和B链)，其中A链含氨基酸残基21个；B链则有30个。肽链由两个胱氨酸二硫键连接，其中所含的脯氨酸残基是形成二聚体的关键位点。胰岛素类似物是在胰岛素的结构上做一些相应的修饰，从而更贴合人体对胰岛素分泌的需求，达到治疗糖尿病的目的。目前对于胰岛素类似物的检测，存在无法实现胰岛素类似物在体内较低浓度水平的精准定量检测的缺陷。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单、分析快速、且能满足胰岛素类似物在体内较低浓度水平的精准定量的检测方法，解决现有的技术问题。

为解决上述技术问题，血液样本中胰岛素类似物的检测方法，其特征在于：采用液相-质谱联用系统对胰岛素类似物进行分析；检测方法包括以下步骤：

步骤一：确定LC-MS/MS条件：

LC条件如下：

流动相：流动相A：含质量比0.1％乙酸的乙腈；流动相B：含质量比0.1％乙酸的水；

梯度洗脱条件包括如下三个阶段：

第一阶段：起始流动相体积比：A:B＝90:10；

第二阶段：流动相体积比：A:B＝52:48；

第三阶段：流动相体积比：A:B＝5:95；

第四阶段：流动相体积比：A:B＝90:10至结束；

且第一阶段和第三阶段的洗脱时间之和大于或等于1.5min；

流速：0.25mL/min；

进样量：10μL；

MS条件如下：

检测方式：多反应监测MRM；

扫描方式：正离子扫描；

离子喷雾电压：5500V；

离子喷雾电压：5500V；

气帘气：35；

雾化气：55；

辅助气：50；

离子源温度：250℃；

碰撞气种类：N₂；

碰撞气压力：High

步骤二：绘制标准曲线：