[发明专利]一种蒙桑种苗的组织培养方法

权利要求书

1.一种蒙桑种苗的组织培养方法，其特征在于，步骤如下：

(1)取蒙桑外植体并进行灭菌处理，得到无菌外植体，所述外植体为蒙桑的休眠芽；

(2)将所述无菌外植体接种于诱导培养基中进行诱导培养，得到诱导苗；

所述诱导培养基是以MS培养基为基础，并添加6-BA、IBA、PVP-40、蔗糖和琼脂得到，所述诱导培养基中6-BA的浓度为1.0mg/L，IBA的浓度为0.5mg/L，PVP-40的浓度为500mg/L，蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为5.5g/L，且所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0；

所述诱导培养为将所述无菌外植体接种于诱导培养基中，在温度为25±2℃、光照强度为1500～2000Lx、光照时间为10～14h/天的条件下培养20天以上，直至无菌外植体生长至3cm左右，得到诱导苗；

(3)将所述诱导苗接种于继代培养基中进行继代培养，得到继代苗；

所述继代培养基是以1/2MS培养基为基础，并添加IBA、GA₃、蔗糖和琼脂得到，所述继代培养基中IBA的浓度为0.5mg/L，GA₃的浓度为3mg/L，蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为5.5g/L，且所述继代培养基的pH值为5.8～6.0；

所述继代培养为将所述诱导苗接种于继代培养基中，在温度为25±2℃、光照强度为2500～3000Lx、光照时间为15～17h/天的条件下培养30天以上，直至诱导苗生根并生长至5～7cm，得到继代苗；

(4)将所述继代苗接种于增殖培养基中进行增殖培养，得到丛生芽；

所述增殖培养基是以MS培养基为基础，并添加6-BA、2,4-D、蔗糖和琼脂得到，所述增殖培养基中6-BA的浓度为1.5mg/L，2,4-D的浓度为0.3mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为5.5g/L，且所述增殖培养基的pH值为5.8～6.0；

所述增殖培养为从所述继代苗中切取带有一个腋芽的小段后，接种于增殖培养基中，在温度为25±2℃、光照强度为2500～3000Lx、光照时间为15～17h/天的条件下培养30天以上，直至该小段继代苗生长至5～7cm，得到丛生芽；

(5)将所述丛生芽接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗；

所述生根培养基是以1/2MS培养基为基础，并添加IBA、蔗糖和琼脂得到，所述生根培养基中IBA的浓度为0.3mg/L，蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为5.5g/L，且所述生根培养基的pH值为5.8～6.0；

所述生根培养为将所述丛生芽接种于生根培养基中，在温度为25±2℃、光照强度为2500～3000Lx、光照时间为15～17h/d的条件下，生根培养20～25天，得到生根苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述灭菌处理为将所述外植体依次使用酒精溶液和氯化汞溶液浸泡后，然后用无菌水冲洗。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)结束后，还包括步骤(6)：将所述生根苗洗净后，在基质中培养15～20天得到移栽苗。