[发明专利]一种检测蜂蜜中甘油含量的测定方法

权利要求书

1.一种检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，其特征在于将蜂蜜先用乙醇溶解，然后将蜂蜜乙醇溶液分散在微粉硅胶中，经过乙腈提取、浓缩、富集，用流动相溶解富集物，用高效液相色谱法，采用色谱柱分离，以赤藓糖醇为内标，测定甘油含量，包括如下步骤：

S1.标准溶液配制

赤藓糖醇使用液：赤藓糖醇用体积浓度95%乙醇配制；甘油贮备标准溶液：甘油用双重蒸馏水稀释配制；甘油工作标准溶液：吸取甘油贮备标准溶液用流动相配制；

S2.供试品溶液制备

称取蜂蜜样品，加赤藓糖醇使用液，加乙醇，加微粉硅胶，搅拌充分分散成细微颗粒，沸水浴蒸干，加乙腈，混匀，超声，离心，吸取上清液，旋转蒸发至干，加流动相，超声，过滤，得到供试品溶液；

S3.阴性基质标准曲线工作溶液的制备

称取蜂蜜样品，加赤藓糖醇使用液，加入甘油工作标准液，加入乙醇，搅拌均匀至完全溶解，加入微粉硅胶，搅拌充分分散成细微颗粒，沸水浴蒸干，加乙腈，混匀，超声，离心，吸取上清液，旋转蒸发至干，加流动相，超声，过滤，得到阴性基质标准曲线工作溶液；

S4.液相色谱分析条件

色谱柱:Kromasil 100-5-NH₂ 4.6mm×250mm×5µm或等效色谱柱；流动相: 体积浓度90%乙腈水溶液；流速: 1.0mL/min；柱温:30℃；检测室温度:35℃；进样量:40μL；

S5.测定

用阴性基质标准曲线工作溶液、供试品溶液分别进样，以甘油与赤藓糖醇峰面积比值为纵坐标，以标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量；

所述S2供试品溶液制备中，蜂蜜样品为5.00g，赤藓糖醇使用液500µL，乙醇6mL，微粉硅胶3.5g，乙腈20mL，超声30min，离心3000rpm5min，1mL流动相。

2.根据权利要求1所述的检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，其特征在于所述的赤藓糖醇使用液的浓度为50mg/mL；所述甘油贮备标准溶液的浓度为200mg/mL；所述甘油工作标准溶液的浓度为2.5mg/mL、10mg/mL。

3.根据权利要求1所述的检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，其特征在于S3阴性基质标准曲线工作溶液的制备中，称取5份蜂蜜样品5.00 g，各加入赤藓糖醇使用液500 µL，各加入2.5 mg/mL甘油工作标准液100 µL、200 µL，加入10 mg/mL甘油工作标准液100 µL、200 µL、500µL，各加入乙醇6mL，微粉硅胶3.5g，搅拌充分分散成细微颗粒，于100℃下沸水浴蒸干，转入50mL塑料离心管中，加入乙腈20mL，混匀，超声30min，离心3000rpm5min，吸取上清液，过滤于50mL玻璃离心管中，残渣中再加入乙腈10mL重复提取一次，过滤，合并过滤液，旋转蒸发至干，加1mL流动相，超声溶解，经0.22μm滤膜过滤，得到阴性基质标准曲线工作溶液，相当于标准溶液系列浓度为250 mg/L、500 mg/ L、1000 mg/L、2000 mg/L、5000 mg/L。