[发明专利]一种检测蜂蜜中甘油含量的测定方法

说明书

本发明提供了一种检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，将蜂蜜先用乙醇溶解，然后将蜂蜜乙醇溶液分散在微粉硅胶中，经过乙腈提取、浓缩、富集，用流动相溶解富集物，用高效液相色谱法，采用色谱柱分离，以赤藓糖醇为内标，测定甘油含量。该方法前处理方法简单，色谱分离度好，无干扰，使用内标法定量，结果准确可靠，方法灵敏度好，检测限达到20mg/kg。可满足小微企业在日常工作中对蜂蜜中的甘油含量进行控制，也可以为检测其他产品中甘油时样品浓缩与净化方法提供参考。

技术领域

本发明属于食品医药的检测领域，尤其涉及蜂蜜中甘油含量的高效液相色谱检测方法。

背景技术

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜，混以自身分泌物经充分酿造而成的甜物质。蜂蜜主要成分为果糖，葡萄糖，水分，还含有相对少量的蛋白质、氨基酸、脂肪酸、酚类化合物、维生素、矿物质等营养保健物质，本草纲目认为蜂蜜具有清热、解毒、补中、润肠、和百药的药理功能。蜂蜜安全性高，是百姓喜爱的流行食品。

由于蜂蜜市场供不应求，所以现在蜂蜜的采收以非成熟蜜为主，非成熟蜜的特点是水分含量较高，约30％～40％，这种蜂蜜极易发酵，从而影响蜂蜜品质。发酵的蜂蜜除了会产生乙醇、丙二醇和二氧化碳外，还会产生少量的甘油，甘油在蜂蜜加工时无法去除，故国外对蜂蜜中的甘油进行限量，以保证蜂蜜的品质。我国由中国蜂产品协会起草的蜂蜜团体标准中，对特级蜂蜜中的甘油限量进行了规定要求不超过300mg/kg。

目前，蜂蜜中甘油的主要检测方法有：分光光度法，气质联用法，食品、药品等其他产品中甘油的测定方法还有：液相色谱法、氧化还原滴定法、比色法、红外光谱法、液相色谱串联质谱法等，未见用液相色谱法检测蜂蜜中甘油的文献报道。其中，分光光度法，需要配制大量的试剂，连续测定空白溶液、蜂蜜试样测定液和标准溶液的吸光度各10次，以得到相对稳定的吸光度值，操作步骤烦琐，对环境的要求较高。而气质联用法，虽不需要净化处理，但操作需要衍生化，颜色深的蜂蜜会产生干扰，不利于准确定量，而且仪器昂贵。这两种方法对操作人员要求较高，不适合大多数企业使用，企业均需要送外部专门的检测机构检验，提高了企业的质量成本，不利于产品竞争。

发明内容

本发明的目的是提供一种即可满足小微企业在日常工作中对蜂蜜中甘油含量的控制，也可为检测其他产品中甘油样品浓缩与净化方法提供参考。

为实现发明目的，本发明采取如下的技术手段：

一种检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，将蜂蜜先用乙醇溶解，然后将蜂蜜乙醇溶液分散在微粉硅胶中，经过乙腈提取、浓缩、富集，用流动相溶解富集物，用高效液相色谱法，采用色谱柱分离，以赤藓糖醇为内标，测定甘油含量。

上述的检测蜂蜜中甘油含量的测定方法，包括如下步骤：

S1.标准溶液配制

赤藓糖醇使用液：赤藓糖醇用95％乙醇配制；

甘油贮备标准溶液：甘油用双重蒸馏水稀释配制；

甘油工作标准溶液：甘油贮备标准溶液用流动相配制；

S2.供试品溶液制备

称取蜂蜜样品，加赤藓糖醇使用液，加乙醇，加微粉硅胶，搅拌充分分散成细微颗粒，沸水浴蒸干，加乙腈，混匀，超声，离心，吸取上清液，旋转蒸发至干，加流动相，超声，过滤，得到供试品溶液；

S3.阴性基质标准曲线工作溶液的制备

称取蜂蜜样品，加赤藓糖醇使用液，加入甘油工作标准液，加入乙醇，搅拌均匀至完全溶解，加入微粉硅胶，搅拌充分分散成细微颗粒，沸水浴蒸干，加乙腈，混匀，超声，离心，吸取上清液，旋转蒸发至干，加流动相，超声，过滤，得到阴性基质标准曲线工作溶液；

S4.液相色谱分析条件