[发明专利]反相/离子交换混合模式色谱固定相、制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种反相/离子交换混合模式色谱固定相、制备方法与应用，此种反相/离子交换混合模式色谱固定相，称之为十八烷基/磺酸基混合色谱固定相，由键合在多孔硅胶表面的十八烷基和磺酸基组成，制备方法为：通过化学气相沉积法将γ‑(2,3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷KH‑560键合到多孔硅胶微粒表面，以KH‑560为连接臂分别与亚硫酸氢钠和十八烷基酰氯反应，制备出十八烷基/磺酸基混合色谱固定相。

技术领域

本发明涉及液相色谱固定相及其制备方法与应用。

背景技术

药物分析技术在药物的研发生产和贮存流通过程中的质量控制起着重要作用。为了提高药物对疾病的治疗效果，不同单个组分药品的联合用药成为广泛应用的策略，但是联合用药引起药物依从性降低，增加患者的风险。近年来发展起来的固定剂量复方药物是含有两个或以上的有效成分的单一剂型，如胶囊或药丸。既能利用不同药物成分的协同作用，提高药物的治疗效果，又能减少患者服用的药片数量，因此，受到了医生和患者的欢迎，产品涵盖抗艾滋病药、抗高血压药、抗感冒药。由于复方药物中含有多种活性成分，与单一组分药物相比，其质量控制的难度大幅增加，迫切需要开发适用的分析方法。

根据《中国药典》2015版及相关文献记载，单一组分药物质量控制中，包括鉴别、含量测定和杂质分析，应用最为广泛的分析技术是反相液相色谱，例如使用十八烷基键合硅胶固定相的反相色谱，但是这类反相色谱柱对于一些极性或离子型化合物的保留较弱，并且由于其表面残留的硅羟基解离与碱性药物发生静电相互作用而造成色谱峰拖尾，影响色谱分离的分辨率，无法实现复方药物中中性及极性离子型化合物的同时分析。为了增加离子型化合物的保留，通常在反相色谱流动相中加入离子型表面活性剂，通过与被分析的反号离子型化合物形成离子对而实现中性与离子型化合物的同时分析。但是离子对色谱技术因为存在两个致命的缺点，使得它在复方药物分析中应用受到极大的限制。其一是在分离过程中涉及离子对试剂在固定相表面的动态吸附平衡，其平衡时间较长，导致在实际药物分离过程中不能使用梯度洗脱，对不同极性或保留能力的组分进行同时分析。其次，由于离子对试剂难以挥发，在离子化过程中引起离子源污染，使得离子对色谱不能与质谱联用，限制了液相色谱-质谱联用技术对不同成分进行结构鉴定的应用。

混合模式色谱是取代离子对色谱，对中性和离子型化合物进行同时分析的优选方法。与传统的单一模式色谱不同，混合模式色谱使用多功能团色谱固定相，其保留机理涉及两种或两种以上不同类型的分子间相互作用，因此具有更强的分离能力。最为常用的混合模式色谱是反相/离子交换色谱，所使用的固定相表面含有疏水和可解离功能基团，因此能够通过范德华尔力和静电力的协同作用，对中性和离子型化合物实现保留和同时分离。由于流动相中不需要添加表面活性剂，因此不存在离子对色谱中所存在的问题，不仅可以使用梯度洗脱分析，还可以与质谱联用，因此，在药物分析中展现了广阔的应用前景。但是，到目前为止，混合模式色谱固定相的品种不多，结构单一，不能适应药物分析领域中日益增长的复杂成分，尤其是复方药物，的分析需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的混合模式色谱固定相，并给出其简便可行的制备方法及其在药物分析领域的应用。

一种反相/离子交换混合模式色谱固定相，称之为十八烷基/磺酸基混合色谱固定相，由键合在多孔硅胶表面的十八烷基和磺酸基组成，其化学结构式为：

所述的色谱固定相的制备方法，包括步骤如下：

(1)活化硅胶的制备：将一定量硅胶微粒加入HCl溶液里进行80℃-105℃的回流反应，用水洗至中性，真空干燥；

(2)环氧基硅胶的制备：将上述酸化的硅胶微粒，每克加入1.92mmol-3.6mmol的γ-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷，在140℃-160℃下密封反应，用无水乙醇洗涤，过滤收集产品并真空干燥，得到环氧基功能化多孔硅胶微球；